品牌疾病动物模型建模评价

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤实施：步骤1、基于crispr/cas9技术构建针对c57bl/6j小鼠rosa26基因的特异性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步骤2、构建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶载体，将打靶载体进行线性化处理；步骤3、步骤2中将含有loxp位点打靶载体、步骤1中有活性的grna1和grna2与cas9蛋白共同注射进入**小鼠受精卵中，获得f0代小鼠；步骤4、将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；步骤5、将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。上海东寰提供动物模型构建过程中的原始实验记录及数据图片。品牌疾病动物模型建模评价

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。裸鼠疾病动物模型建模疾病动物模型建模公司哪家好？

即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交，可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图；图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图；图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图；图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图；图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图；图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。

1、动物模型名称：胆管结扎致肝胆管性肝硬化大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雄性4、实验动物年龄：5周5、实验动物体重：200~220g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：用胆管结扎法。大鼠按10mg/kg体重腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，腹部皮肤消毒，无菌操作沿腹部正中线剪开腹腔，分离出胆管，在胆管近端和远端2处结扎胆管。手术后正常饲养28天。28天后解剖取肝脏进行组织病理学检查。2、检测标准：肝脏病理切片镜下小胆管伴纤维组织增生积分按程度为0-3分：0分：无明显病变；1分：呈局灶性分布，受累面积在30%以下者；2分：呈多灶性分布，受累面积在30%-70%之间者；3分：呈弥漫性分布，受累面积在70%以上者。上海东寰告诉您如何选择好的动物模型。

2mg组、4mg组、6mg组lh水平均上升，同样，只有2mg组有明显升高(p＜)，如图3所示。表3表4②体重变化：(mean±sd)，如图4所示：2mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第2天开始)。3mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第4天开始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg组(第1、8天注射)与空白组相比，大鼠体重分别在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg组体重在停止给药后4天与空白组无差异。③卵巢重量：如表5、图5所示，2mg、6mg组大鼠在经过顺铂注射后卵巢重量相比对照组，都有不同程度缩减，其中2mg组卵巢重量明显减轻(p＜)，4mg、6mg组无明显差异。表5④动情周期观察(阴道涂片)：3mg组动物死亡时间早，无完整的动情周期。如表、图6所示。正常大鼠动情周期4-5天。分为四个阶段，动情前期：撇圆形有核上皮细胞占绝大多数，白细胞和角化上皮细胞很少(图a)。动情期：角化上皮细胞占多大多数，由散在增至集白细胞和有核上皮细胞很少(图b)。动情后期：片状角化上皮细胞，有核上皮细胞和白细胞3种都有，无太大差异(图c)。动情间期：白细胞占绝大多数，有核上皮细胞和角化上皮细胞很少(图d)。表6⑤病理结果：如图7所示能够准确模拟人相关特定功能与疾病特征。普陀区心血管疾病疾病动物模型建模

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