培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg～320mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。缓冲系统大多数细胞所需pH在-。但是，细胞培养适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH(-),而传代转化细胞系则需要偏酸pH(-)。由于多数培养液靠碳酸氢钠（NaHCO3）与CO2体系进行缓冲，因此，气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5％，培养液中NaHCO3的加入量为；如果CO2浓度维持在10％，培养液中NaHCO3的加入量为。细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH-范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。Ham’s F-10适合用于人二倍体细胞的培养，低血清条件下细胞的克隆化培养，及动物的原代细胞培养。云南昆虫细胞培养基检测
Dulbecco’s改良培养基–DMEM（Dulbecco’sModifiedEagleMedium）是在MEM培养基的基础上研制的，与MEM培养基相比，氨基酸的含量增加了2倍，维生素的含量增加了4倍，同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及**酸钠。DMEM培养基**初设计葡萄糖含量为1000mg/L（低糖型），后来又发展出葡萄糖含量为4500mg/L（高糖型），现已广泛应用于各种细胞的培养。高糖型培养基普遍应用于生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA转染的转化细胞、各种原代病毒宿主细胞、单一细胞的培养以及疫苗的生产，例如利用CHO细胞表达EPO和生产乙肝疫苗。低糖培养基更适合代谢作用较慢、依赖性贴壁细胞的培养。不含葡萄糖的培养基可以根据研究需要，随意调节葡萄糖的浓度，方便快捷。L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养元素，但其在溶液中不稳定，会自发降解，不含L-谷氨酰胺的培养基，可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量，在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。 贵州华晨阳细胞培养基供应商家添加HEPES的培养基能较长时间保持恒定的PH范围，可有效的防止培养液PH波动较大对细胞生长产生不利的影响。
含丰富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成（采用平衡盐溶液溶解）与合成培养基（如MEM细胞培养基）以1:1的比例混合使用。目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5~20%，常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份复杂，批间差异大及存在病毒等外源污染风险，对下游生物制品的分离纯化和安全性都存在较大的影响，在生物制药行业的使用也越来越少。因此，基于对血浆成份的分析，合成细胞培养基应运而生。合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。开发的基础培养基（minimalessentialmedium,MEM）。
1.细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5%CO2的培养条件。天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、鸡胚浸出液等。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，但缺点是成分复杂，来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物。Fischer’s培养基是Glen Fischer在美国国家ai症研究所设计的，初用于小鼠白血病细胞的培养。
Leibovitz’sL-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成，代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统，同时，用半乳糖和**酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成，有助于维持培养液PH的稳定，适合用于非CO2平衡环境的细胞培养。Leibovitz’sL-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代（如胚胎和成人组织）细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等。L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养元素，但其在溶液中不稳定，会自发降解，不含L-谷氨酰胺的培养基，可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量，在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。 Leibovitz’s L-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成，代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统。医用细胞培养基供应商家
MEMα是一种改良的MEM培养基，在MEM的基础上又添加了NEAA、硫酸锌、VB12、生物素、抗坏血酸等成分。云南昆虫细胞培养基检测
MEMα是一种改良的MEM培养基，与MEM培养基相比MEMα培养基营养更为丰富，在MEM的基础上又添加了NEAA、**酸钠、硫酸锌、VB12、生物素、抗坏血酸等成分，广泛应用于各种哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养。不含核苷和脱氧核苷的MEMα培养基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型细胞的筛选培养基。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（Alanyl-glutamine，Ala-Glu），又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽，是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养素，但其在溶液中不稳定，会自发降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨对细胞有害；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的稳定，不会自发的降解。细胞利用其机制是：在细胞培养时，细胞会逐渐向培养液中释放一种肽酶，将L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，而后细胞会将这两种水解产物吸收利用。细胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的过程与流加培养策略相似，连续的将低浓度水平的L-谷氨酰胺加入到培养液中，从而提高了L-谷氨酰胺的利用率，且不会生成多余的氨，更利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰可以代替等摩尔的L-谷氨酰胺，适用于所有的细胞，几乎无需适应。 云南昆虫细胞培养基检测
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