组织外泌体质谱

外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。外泌体能够负载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等，且在体液中宽泛分布且具有定向归巢能力。外泌体独特的生物兼容性、高稳定性、瘤靶向性使其在未来瘤治理中有很大的利用价值。外泌体能够装载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等。作为小分子化合物载体，外泌体装载姜黄素、紫杉醇、阿霉素等主要是用于抗瘤研究；已经发现外泌体可递送多种蛋白质，例如酶，细胞骨架蛋白质和跨膜蛋白质；外泌体作为核酸分子的药物载体主要用于基因治理，外泌体天然的可以携带遗传（例如miRNA，siRNA）到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。外泌体在体液中十分稳定，同时外囊泡所含的蛋白质和RNA被外泌体的脂质双层膜所包被也不会分解。组织外泌体质谱

瘤在生长过程中会不断地将外泌体释放到周围环境中去，同时，外泌体能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更长时间，可以从患者的体液中分离外泌体用于早期临床诊断。随着技术的进步，已经有生物公司尝试涉足外泌体领域，外泌体中存在黑色素瘤标志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相关蛋白，且黑色素瘤患者胞外体中MIA和S100B浓度显着高于健康人群和非黑色素瘤患者，通过检测MIA和S100B表达水平对黑色素瘤的诊治具有积极地参照作用。从本质上说，液态活检是分子诊断在样本来源上的延伸，进一步丰富了检测手段，而随着外泌体的不断揭秘，相信其会在液态活检中发挥越来越重要的作用。细胞外泌体抗体是什么外泌体作为一个新型的研究热点，由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性。

结果表明，PS亲和法可以检测到许多目前为止都无法检测的外泌体蛋白质和RNA。应用Tim4的外泌体强结合能力，可用ELISA或FACS高灵敏度定性检测、定量分析外泌体。以前无法用超速离心法提取的微囊泡，也通过运用PS亲和法实现高纯度提取。本指导书中对该技术进行详细说明，这项技术的有用性今后将受到世界各方评价，有望在外泌体和微囊泡生理功能的分析研究上起重大贡献。外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。研究人员尚未统一定义以何种方法提取的细胞外囊泡可以称之为外泌体，给实验数据的分析和重复性确认带来困难。近年，随着国际细胞外囊泡协会的成立、世界性研究者研讨会的举办，提案MISEV指南作为国际标准，计划或已经开始进行EV研究的科学家请务必阅读这些方针。

在免疫系统中，淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等均可以产生外泌体。研究表明免疫细胞来源的外泌体能够明显影响机体的免疫调节机制，包括调节抗原呈递、免疫激huo、免疫监督等。不同免疫细胞来源的外泌体功能不同，以树突状细胞(该细胞具有免疫刺激能力，是目前能够激huo初始T细胞的抗原递呈细胞)来源的外泌体为例，其外泌体的免疫刺激作用取决于来源细胞的成熟状态。成熟的树突状细胞外泌体内包含能够直接激huoT细胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和热激蛋白，这些分子使树突状细胞来源的外泌体具有抗原呈递、调节免疫响应的生物功能。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体。

目前市面上开发的外泌体提取试剂盒，是根据外泌体表面由类似于细胞膜的脂质双分子层具有一定疏水性这一特性，用试剂捆绑水分子，从而可通过常规离心收集沉淀获取外泌体。这种快速提取外泌体的方法虽简便快捷、样本需求少、对设备要求低，但与差速离心方法类似，其分离得到的沉淀包含其他细胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分复杂，很可能掺杂一些未知的疏水大分子物质。Sabapatha等曾根据来源于胎盘的外泌体表面特异表达这一特性，使用耦合到磁珠的抗抗体，采用磁珠分选方法分离血浆中胎盘来源外泌体。此法可以提取的胎盘外泌体量少，不适用于大规模提取制备，且免疫磁珠价格昂贵，不利于提取技术的普及。外泌体的细胞源：人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体。腹膜透析液外泌体测序

关于外泌体相关的实验技术，关于需要改进的课题存在很多。组织外泌体质谱

Vlassov等人发表的一篇外泌体的提取方法及组成的专利文献中介绍，通过终浓度为8%的PEG6000与生物体液共孵育14h后，10000xg离心1h，可将直径在30-150nm之间，且包含丰富RNA的外泌体沉淀下来。因此采用终浓度为8%的PEG6000沉淀血清中的外泌体，为了进一步纯化胎盘相关外泌体，将获得的包含外泌体的沉淀用PBS重新悬浮后，加入非线性蔗糖密度梯度层，10000xg超速离心5h，将分层液采用PEG6000进行2次沉淀。经过多次实验反复验证，确定同时表达外泌体标志蛋白分子及胎盘特异性蛋白分子的胎盘来源外泌体所在密度层。组织外泌体质谱

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