细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都很性感。更多Polysciences PEI相关产品内容欢迎咨询上海曼博生物医药科技有限公司!也欢迎关注我们的公众号:Mine-Bio。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!PEI转染试剂是一种合成的聚乙烯亚胺聚合物。高质量PEI转染试剂试用装操作说明清晰
准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!高质量PEI转染试剂试用装操作说明清晰PEI转染试剂的残留检测方法怎么开发呢?
Polysciences 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于工业化生产。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge)。PEI可用作转染试剂,它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。有实验证明,分子量为25000的线性PEI即Polysciences 23966(PEI 25K)转染效率表现优良。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!
上海曼博生物医药科技有限公司成立于2019年,依托于集团公司泉心泉意深厚的资源和超过400家国内客户群体,生命科学领域一站式供应链体系,以及高风险生物危险材料进出口平台的优势,曼博生物严格筛选国际创新且经过同行验证过的产品和技术,引入中国市场,开发、孵育和推广,致力于将全球创新产品和前沿技术带入中国,集中在为细胞/基因领域、/免疫,抗体药物研发客户提供小众创新产品,包括从Researchgrade到cGMP等级的无动物源培养基质,转染试剂、病毒转导试剂、基因编辑工具等产品和定制服务,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)药物研发从R&D到Clinicaltrial以及后期商业化的无缝转化。更多关于Polysciences PEI相关产品问题,欢迎咨询上海曼博生物!也欢迎关注我们的公众号:Mine-Bio。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!哪个品牌的PEI转染试剂性价比更高?
注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。近期还有PEIfree申请活动,欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!PEI转染试剂可以转染哪些细胞?经济高效PEI转染试剂试用装可进行批次验证
PEI转染试剂有没有毒性?高质量PEI转染试剂试用装操作说明清晰
1、细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。2、制备PEI-DNA混合物:以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管,一管将质粒DNA(总量2-8μg为佳)加入240μLHBS中,混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混匀后室温静置20-30min。将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。注:每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的浓度一致。3、培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16h左右可以观测到报告基因的表达。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!高质量PEI转染试剂试用装操作说明清晰
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