brain：脑组织；liver：肝脏；retina：视网膜，intestine：肠；muscle：肌肉；heart：心脏；kidney：肾脏；spleen：脾；b：图1中a的统计结果；c:westernblot检测gm20541蛋白在不同组织的表达；d:图1中c的统计结果。图2：gm20541基因敲除小鼠的构建路线；图中sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠；ctr是指野生型；het是指杂合子。图3：中长距离pcr鉴定子一代鼠的结果；图中：a：扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r,扩增产物为；其中a2,3,6,9,10,b1为阳性；b：扩增3’端长臂使用引物对neof和gm3’lrr，扩增产物为。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g为阳性杂合子，+/+为野生型对照。图4：gm20541基因敲除小鼠的鉴定；a：gm20541基因敲除小鼠的基因型鉴定结果；b：实时定量pcr实验分析gm20541敲除小鼠视网膜中基因敲除效率，证明gm20541在敲除小鼠视网膜中不再表达；sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠；ctr是指野生型；het是指杂合子。图5：暗适应视网膜电图(electroretinogram,erg)检测结果；图中：a-c：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图轨迹图；d：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图a波统计。特发性肺纤维化（IPF）小鼠模型建立。兔动物模型实验
SD大鼠脑缺血致脑梗死模型【材料】水合氯醛、线栓直径（体重250-300g）【方法】1、10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。2、仰卧位固定，颈正中线切口，分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。3、微动脉夹暂时夹闭颈内动脉（ICA），活扣结扎近心端颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）打双结，在双结中间剪开小口插入线栓。4、将拴线插入到颈内动脉（ICA），用眼科镊轻推拴线，以颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）分叉处为参考位置。5、栓线插入预刻深度，感到有阻力，说明栓线已到达脑中动脉（MCA）,打结固定栓线。6、血管外的栓线不要留得过长，1h后拔出栓线，缝合伤口，单笼饲养观察。注：前两三天老鼠会萎靡，不进食，注意不要，老鼠无死亡即可。西藏裸鼠动物模型造模急性肺损伤(acute lung injury，ALI)。
转基因小鼠对黑色素瘤发生的分子途径的理解有重要意义。此外，转基因小鼠是可靠且可重现的模型，用来评估受损基因对黑色素瘤生物学的影响。应用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因组改变在黑色素瘤的发生和发展的重要性及药物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一种富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，为胶原原纤维形成的关键调节剂。黑色素瘤中Lumican表达降低与浸润相关。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物导入胚胎干细胞，建立Lum－/－转基因小鼠。该模型可提供与发生和转移相关机制及可见变的进展，以及确定负责的黑色素瘤进展的基因。2Tyr::N-RasQ61K转基因小鼠方法：有研究者使用突变的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K构建体，并注射到卵母细胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K转基因小鼠。3BrafV600E转基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重组酶技术从内源性Braf基因中诱导BrafV600E表达，建立BrafV600E转基因黑色素瘤小鼠模型。总结目前已有三种不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于实验动物与人类基因组、基因调控、细胞类型、结构与组成等方面是有一定差别。
指明方向。尽管现在基因组学、转录组、蛋白质组等组学已经取得了非凡的突破，但人类对于组学的整体性和复杂性认识还是很初级，也就比开始高明那么一点点，对横亘在组学和个体之间的裂隙毫无办法——这也是目前生物研究被黑的重要原因之一：由于目前还不存在什么生物根本性原理，很多研究还是得靠盲人摸象式的实验、观察和归纳。当年山中伸弥找到诱导分化细胞核重编程（也就是IPSc技术）的四个基因，可不是用理论算出来的，是大海捞针般地从成百上千个转录因子基因组合中筛选出来的。尽管以前的研究能有所帮助，但本质还是差别不大，这也是为什么分子生物学科研常常被类比成民工搬砖。明白了这个背景，你大概就能理解小鼠的意义。既然我们对复杂系统的架构原理毫无办法，那我们不妨就建立一个标准模型，自上而下地研究问题。诚然，动物模型和人类差别巨大，小鼠、大鼠、兔、猴身上做的好好的实验，放在人身上就不灵了（有时候，即使是针对某一个人群成功的实验，换一个人群就不灵了，人类内部的多样性都不容小觑）。但是，同在哺乳动物大家庭，大家的系统架构应该是差不多的，差别只在细节，问题已经从大海捞针变成了池塘捞针。为什么药物会失效呢？如果是靶点有差异。高脂饲料致高脂血症大鼠模型。
我们知道WB实验步骤繁琐，一次实验历时也不短，从提蛋白到显影结束可能要三天，我们就讲一下这里面的一些关键环节。一、蛋白提取及变性1、提取蛋白很多经验丰富的WB实验者都深有体会，蛋白提取是影响结果重要的环节之一。该过程重要的是防降解和保证蛋白浓度不要太低。防降解主要有两点，一是裂解前注意保持样品处于低温环境中，二是裂解时加入足够的蛋白酶抑制剂。我们习惯先用冰冷的PBS做心脏的体循环灌注，然后冰上取脑，分离各脑区(嗅球，皮层，海马，中脑，小脑，延髓，丘脑，纹状体)后置于，用液氮速冻后转移至-80度冰箱长期保存。接着是保证蛋白浓度，即要加入适量的裂解液，加太少会使蛋白提取不充分，加太多会让蛋白浓度太低，一般经验是这样的，细胞样品例如一个六孔板的细胞加60微升的裂解液，动物组织的话每毫克组织加10微升裂解液。还要加上超声破碎处理，具体方案见讨论部分。如果没有超声破碎仪，那就用1毫升注射器不断抽吸，冰上反复抽吸1分钟左右，注意不要产生过多气泡。(需要灌注取材的视频可以私聊获取，由于文件过大，又比较血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白变性加入上样缓冲液后100摄氏度煮10分钟，这里的上样缓冲液有两种可选。可以克服人类某些疾病潜伏期长，病程长和发病率低的缺点。西藏C57动物模型饲养
因此，外科结扎胆总管并使胆总管完全阻塞已成为引起啮齿动物梗阻性胆汁淤积性损伤的常用模型。兔动物模型实验
静置25分钟后把酒精倒干，用吸水纸吸出多余的酒精，然后配压缩胶，同样的操作，关键是梳子要插得快，要小心梳子下产生气泡，然后静置30分钟。如果是当天跑胶，我会等上层胶凝2个小时再用，但要注意防干燥缩水，可以在一个小时的时候沿着梳子上缘加点电泳液。所以我一般提前一晚制胶，泡于纯水或者电泳液里置于4度冰箱暂存。三、蛋白电泳1、上样前准备把胶组装到电泳芯上，注意密闭性(否则漏液)，如果内槽漏液就不是匀强电场了，条带可能就不是一条直线。然后内槽倒满电泳液，拔梳子，这一步要小心，梳子要两边一起缓缓往上拔出，然后观察泳道内有无脱落的胶粒或者胶丝，有的话用1毫升注射器吸出。然后从冰箱取出蛋白样品，解冻。准备振荡器。2、上样和电泳注意，上样后蛋白会开始慢慢在胶中弥散，所以上样越快越好。我习惯先上蛋白Marker,再上蛋白样品，蛋白上样前确保样品完全解冻和充分振荡(推荐使用振荡器振荡)，吸的时候没有拉丝即可，建议上样分钟把样品从冰上取出来，不然样品中SDS可能会结晶析出，从而影响电泳效果。上层胶80V25分钟，下层胶120V65分钟。四、转膜1、转膜前准备我会在电泳结束0分钟准备，把转膜液配好置于4度冰箱预冷，然后裁膜，准备转膜装置。兔动物模型实验
