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高盐核酸酶基本参数
  • 品牌
  • ArcticZymes Technologies
  • 型号
  • 70921-202/70921-150/70921-160
  • 货号
  • 70921-202/70921-150/70921-160
  • 中文描述
  • SAN HQ高盐核酸酶
  • 规格
  • 25kU/500kU/5MU
  • 级别
  • HQ及GMP
  • 应用领域
  • 大规模生物药生产中,去除核酸残留
高盐核酸酶企业商机

跟其他类型的核酸酶一样,SAN HQ高盐核酸酶和M-SAN HQ中盐核酸酶的灭活方法有很多,分为可逆灭活及不可逆灭活。金属离子螯合剂如EDTA会可逆抑制两者的活性,加入的EDTA浓度一般是溶液中Mg2+浓度的2倍左右即可完全抑制活性;后续补加过量的Mg2+即可恢复核酸酶活性。加热、还原剂(如DTT)、咪唑、甘油及表面活性剂(如高于15%浓度的Triton X-100、SDS、尿素等)等都可以使其不可逆失活。在生物工艺流程,需要结合上下游应用需要选择合适的方法去除或灭活核酸酶。在AAV生产过程中使用SAN HQ高盐核酸酶。浙江上海倍笃生物高盐核酸酶70921-202

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宿主细胞DNA残留的担忧是基于致ai风险理论,特别是生产细胞系所包含的致ai序列,比如较常见腺病毒基因E1A和E1B(HEK293, PerC.6 和CAP 细胞系),人乳tou瘤病毒E6和E7基因(HeLa细胞系)等。当使用致ai细胞系生产AAV时,下游纯化须尽可能减少残留DNA。工业上一般使用核酸酶分解残留DNA,普遍认为小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai风险。宿主细胞蛋白残留与免疫原性、炎症或过敏性休克有关。尽管与非人类的生产原料相比(非人类细胞系如BHK21或昆虫细胞,以及辅助病毒如HSV、腺病毒、杆状病毒),人类细胞免疫原性比较弱。河南上海倍笃生物高盐核酸酶SAN HQ高盐核酸酶是用Pichia pastoris表达的重组非特异性内切核酸酶。

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氯化铯(CsCl)/碘克沙醇密度梯度离心大概是经典的AAV纯化技术了。这种技术适用于所有血清型且分辨率高,但是因生产工艺很难放大,低通量等缺点阻碍了其在工业中的应用。继密度梯度离心之后,色谱法不断发展,并逐渐成为一种成熟的、主流的方法。色谱法通过载体的净电荷、疏水性、对配体的亲和性、大小以及其他性质来分离并纯化载体。这类技术有诸多的优点:更具可扩展性和成本效益,可多次重复使用,可并行运行或串联运行,还可有效去除非定植剂,这是开发后期的一个关键方面。

ArcticZymes产品广泛应用于药物生产、分子研究、体外诊断等领域。例如,在药物生产领域,盐活性核酸酶(SANs)系列产品用于细胞基因药物及Vaccine的virus载体生产过程。在分子研究领域,虾碱酶(SAP)、DNA酶(Dnase)、蛋白酶(AZ Proteinase)、连接酶(R2D Ligase)等用于头部Life Science品牌的科研kit中。在体外诊断领域,等温扩增酶、UNG酶、蛋白酶等产品应用于国际TOP诊断公司的生产流程中。此外,ArcticZymes专注于开发更好的解决方案,不断超越合作伙伴的期待,从而与合作伙伴建立牢固可靠的关系。ArcticZymes Technologies成立于20世纪80年代后期,总部位于挪威北部的特罗姆瑟(Tromsø)。

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在生物工艺中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主细胞DNA(HCD),并将其分解成足够小的片段,以便在下游纯化过程中去除。虽然大多数核酸酶可以在生理盐条件下高效地将裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸链,但实际生产中的核酸污染情况更加复杂。HCD通常以染色质形式存在,与细胞裂解碎片、病毒颗粒等结合在一起,影响核酸酶的识别及剪切。因此,HCD去除的关键在于——核酸酶如何在复杂的生产体系中识别并剪切HCD。致力于从深海微生物中识别新的冷适应酶,用于分子研究、体外诊断和制药领域。青海500mM盐浓度条件高盐核酸酶70921-202

SAN HQ高盐核酸酶促进残留DNA的消化,有助于符合FDA要求。浙江上海倍笃生物高盐核酸酶70921-202

监管部门对HCD的残留量有明确的规定。美国FDA发布的指导原则中指出生物制品HCD残余限度为 100pg/剂,对于大剂量生物制品如单克隆抗体,根据其残留DNA来源及给药途径,残留量可放宽至 10ng/剂。细胞基因药物终产品的DNA残留有两种来源,分别是宿主细胞DNA(HCD)和转染用的质粒。质粒和HCD的存在形式不同,去除效率也差别很大。其中,质粒是裸露的DNA双链,带强负电荷,通过色谱纯化主要是离子交换能够很高效去除;HCD则是以核小体紧密折叠形成的染色质形式存在,几乎不以裸DNA形式存在,所以很难去除。浙江上海倍笃生物高盐核酸酶70921-202

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