一般来说,生物生产工艺用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注册商标)为主,能高效降解任何形式(双链、单链、线状、环状)的DNA和RNA。该酶来自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通过E.coli发酵生产得到。该酶的适宜反应条件是低盐浓度范围(<100mM盐浓度),且酶活随着盐浓度上升而下降,在300mM盐浓度时酶活几乎丧失。对于细胞基因药物常用的两种病毒载体LV和AAV,LV由于含有脂包膜结构一般都在生理盐条件下存在,而AAV在高盐条件下不易团聚、更稳定。而在生理盐浓度及更高浓度条件下,Benzonase活性受到抑制。使用SAN HQ高盐核酸酶可以更少的酶量获得更高的去除率,对载体的产量和活性没有任何负面影响;云南基因药物生产用高盐核酸酶
细胞基因药物的基因递送有病毒及非病毒两种方式,其中病毒递送更为常用。在病毒递送路径中,腺相关病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的两种载体;差别是病毒基因组的存在形式,AAV的基因组一般不整合到染色体中,以游离形式存在于染色体之外,且一般会表达数年之久;而慢病毒的基因组则会整合到染色体达到长期持续表达的目的。此外,其它用于基因药物的病毒载体有单纯疱疹病毒(HSV)、痘苗病毒(Vaccina Virus)、痘病毒(Poxviruses)。北京500mM盐浓度条件高盐核酸酶70921-160SAN HQ用量是Benzonase用量的1/3-1/4,酶用量更少,成本更低、工艺更简单。
ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高盐核酸酶及其对应的SAN HQ ELISA kit。该试剂盒原理是采用双抗夹心法定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中SAN HQ高盐核酸酶的残留含量,特异性的anti-SAN作为捕获抗体偶联在96-well plate,生物素Biotin标记anti-SAN作为检测抗体,链霉亲和素-HRP偶联物起到信号放大作用,TMB是终反应底物。该试剂盒特异识别SAN HQ高盐核酸酶,对其它核酸酶没有特异性结合。它的定量范围是0.4-25.6ng/ml,检测精确度高RSD<=15%,2-8℃条件下保存12个月。
SAN HQ高盐核酸酶发挥酶活性的条件比较广。例如,该酶适宜的盐浓度(NaCl)范围是400mM-600mM,能耐受高达1M NaCl浓度。适宜反应温度为25℃-37℃,能耐受4℃-38℃。Mg2+浓度大于1mM即可,在5-20mM范围即可表现更高活性。跟全能核酸酶类似,SAN HQ高盐核酸酶也是一款碱性核酸酶,其适宜pH为8.0-8.9,能耐受6.8-9.5。为了达到更高酶活性,可以通过调节pH实现。鉴于SAN HQ的耐受性,可以用于很多应用,如大规模生产、蛋白纯化、蛋白组学等。ArcticZymes所有产品的开发、生产及销售等都符合ISO13485:2016质量管理体系标准。
从细胞中释放AAV载体的基本机械技术是反复冷冻/解冻,然后是低速离心步骤然而,但是这种技术很难放大生产。机械均质,如法式压滤,是另一种裂解方法,在这种方法中,细胞膜在高压剪切力作用下发生破裂。虽然这种方法是可放大的,但是由于剪切应力引起的聚集和沉淀,往往会导致产品损失。而化学裂解方式,例如Triton X-100在病毒载体纯化过程有较高的总收率,而且易于放大。但是也有其局限性。研究表明,Triton X-100造成了一些急性口服毒性、眼睛损伤、皮肤刺激和慢性水生毒性。因此,该去垢剂在2016年被欧洲化学品管理局(European Chemicals Agency)被列为需要高度关注的物质。在符合ISO13485:2016体系基础上,增加了cGMP相应要求。甘肃基因药物生产用高盐核酸酶70921
SAN HQ是生物工艺流程中去除核酸污染的理想选择。云南基因药物生产用高盐核酸酶
基因药物是指将外源基因引入靶细胞,纠正或补偿基因缺陷或异常引起的疾病的。这种策略对许多疾病的康复有很大的潜力,包括ai症、神经退行性疾病和心血管疾病。目前已经进行了2000多项基因药物临床试验,大多数载体已被证明是有效和安全的。目前的研究表明,大约64%的基因药物临床试验是为了医治ai症疾病,而最常见的策略是传递抑制cancer生长或杀死cancer的基因。基因药物的关键是使用安全有效的基因传递载体,如病毒载体和非病毒载体。病毒载体是常用的基因导入的方式之一。而腺病毒的载体由于转基因效率高,不受靶细胞是否分裂的限制,容易制备高滴度的病毒载体,在基因药物和免疫领域有更多的应用。云南基因药物生产用高盐核酸酶
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