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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀(RIP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。
2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性,而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证:选择已经过免疫沉淀(RIP)或相关应用(如Western blot, IHC)验证的抗体,这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息:选择信誉良好的抗体供应商,并查看供应商提供的技术数据和客户评价,以帮助做出决策。
免疫沉淀技术ChIP的优缺点是什么?上海Co IP免疫沉淀外包公司

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免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
北京anti Flag免疫沉淀磁珠多少钱免疫沉淀技术ChIP的原理是什么?

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Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其实验设计如下:
1. 样品准备:Co-IP实验通常有两种,一种是内源性蛋白相互作用验证,一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达;非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。
2. 沉淀诱饵蛋白:利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体,抗体会与诱饵蛋白结合,利用磁铁将磁珠拉下,同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。
3. SDS-PAGE及WB检测:得到沉淀后,需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离,随后利用WB检测是否存在靶蛋白。
4. 实验对照设置:为了避免“假阳性”,需要设置正确的对照,包括阴性对照和阳性对照(Input组)。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测,验证细胞裂解液中存在蛋白。
5. 结果真实性:确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验方法通常包括以下步骤:
1. 样本准备
2. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。
3. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上,如琼脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反应:将裂解液与特异性抗体(固定或未固定)混合,并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜,以允许抗体与目标蛋白质充分结合。
5. 固相支持物的回收:对于未固定的抗体,加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。
6. 洗涤:去除未结合的蛋白质和杂质,通常需要多次洗涤固相支持物。
7. 洗脱:使用适当的洗脱缓冲液(如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液)从固相支持物上洗脱免疫复合物。
8. 后续分析:对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等,以进一步分析目标蛋白质。
免疫沉淀和免疫共沉淀的区别?

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免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。
RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可以通过分离纯化,对这些复合物中的RNA进行检测,如qPCR验证或测序分析。
表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注增加。RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展,使研究人员能够定位 RNA-蛋白质相互作用。
免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠?苏州IP免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术RIP的实验方法。上海Co IP免疫沉淀外包公司

免疫共沉淀分析(Co-IP)与IP十分类似,基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体;但IP的目标是纯化单一抗原,而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。

在Co-IP实验中,已知抗原称为诱饵蛋白,与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等,蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。
基本的Co-IP实验方案与IP相同,实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是,还有许多其他因素需要考虑,例如,结合和洗涤条件的优化,优化时,需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。
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世途科生物简介:

上海世途科生物科技有限公司是一家集研发、生产、销售于一体的,为全球用户提供生物试剂的生命科学企业。世途科生物(CYTOCH)汇集了一支由海内外KOL组成的研发团队,他们在生物和化学领域拥有相当丰富的研发经验,通过将化学与生物技术相结合,致力于现有技术难点突破、新技术研究,为相关科学研究者提供思路和解决办法。

凭借着强大的研发实力和严谨的质量管理,通过产学研合作,加快客户科研成果的转化,不断推动行业的发展。

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Co IP免疫沉淀外包公司 2024-12-12

蛋白免疫沉淀是一种常用的实验技术,用于分离和富集特定蛋白质。该技术基于抗体与目标蛋白质的特异性结合,通过沉淀和洗涤步骤,将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来。本文将介绍蛋白免疫沉淀的原理、步骤和应用。蛋白免疫沉淀的原理是利用抗体与目标蛋白质的特异性结合。首先,需要选择与目标蛋白质特异性结合的抗体。这可以通过多种方法实现,如免疫化学方法、重组蛋白质技术等。然后,将抗体与目标蛋白质所在的混合物反应,使抗体与目标蛋白质结合形成免疫复合物。凭借抗体的专一性,蛋白免疫沉淀能从复杂体系中获取特定蛋白进行分析。Co IP免疫沉淀外包公司在生命科学的神秘领域中,蛋白免疫沉淀技术犹如一把锐利的钥匙,为我们开启了...

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