免疫沉淀Co-IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀ChIP抗体的选择?杭州RIP免疫沉淀磁珠的选择
RIP 技术的原理(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀)主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。
RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同,如:RIP反应体系中的试剂和抗体不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等。
杭州免疫沉淀技术服务免疫沉淀技术ChIP的原理是什么?
免疫沉淀IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物学实验方法,用于从细胞或组织裂解物中分离和纯化特定蛋白质。这项技术依赖于抗体的高度特异性,通过抗体与目标蛋白质的结合,实现对目标蛋白质的富集和纯化。
具体操作步骤通常包括以下几个阶段:裂解细胞或组织,抗体与蛋白质结合,固相支持物的使用,免疫复合物的捕获,洗涤,洗脱分析。
免疫沉淀技术不仅可以用于检测蛋白质的存在和量,还可以用于研究蛋白质的翻译后修饰、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质稳定性以及蛋白质的功能等。此外,免疫沉淀技术是许多其他高级实验技术的基础,如染色质免疫沉淀测序(ChIP-Seq)和蛋白质相互作用网络分析等。
免疫沉淀技术Co-IP的实验方法。
Co-IP的实验步骤:
1. 细胞裂解:首先,细胞或组织被裂解,释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合:然后,将特异性抗体(针对已知蛋白质之一的抗体)加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白(诱饵蛋白)上。
3. 免疫复合物形成:抗体与目标蛋白结合后,形成免疫复合物。
4. 沉淀:接着,使用蛋白A或蛋白G结合的珠子(如琼脂糖或磁性珠子)来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合,从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤:捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析:免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析,如Western blot(WB)或质谱分析,以鉴定相互作用的蛋白质。
免疫沉淀IP抗体的选择?南京anti DYKDDDDK免疫沉淀技术服务
免疫沉淀技术ChIP是什么?杭州RIP免疫沉淀磁珠的选择
ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验设计概述:
1. 目标蛋白的选择:确定您想要研究的目标蛋白,例如特定的转录因子或组蛋白修饰。
2. 样本的准备:根据研究的需要选择合适的细胞或组织样本。
3. 抗体的选择:选择具有高特异性和亲和力的抗体,这对于实验的成功至关重要。
4. 交联:使用甲醛等交联剂将蛋白质与DNA在体内共价结合,形成稳定的蛋白质-DNA复合物。
5. 细胞裂解:裂解细胞以释放染色质,同时保持蛋白质-DNA复合物的完整性。
6. 染色质的剪切:通过超声或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段,通常在200-1000 bp之间。
7. 免疫沉淀:使用特定抗体与目标蛋白结合,然后利用蛋白A/G磁珠沉淀复合物。
8. 洗涤和洗脱:洗涤沉淀物以去除未特异性结合的蛋白质和DNA,然后洗脱目标蛋白-DNA复合物。
9. 逆转交联:使用蛋白酶K处理样品以逆转交联,释放DNA。
10. DNA的纯化和分析:纯化DNA并使用qPCR、芯片或测序技术(如ChIP-seq)进行分析。
杭州RIP免疫沉淀磁珠的选择
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