企业商机
免疫沉淀基本参数
- 品牌
- 世途科生物
- 产品名称
- 免疫沉淀磁珠Protein A/G
- 有效期
- 12个月
免疫沉淀企业商机
真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
免疫沉淀技术IP的实验设计。深圳Co IP免疫沉淀外包公司
Co-IP的实验步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。
4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。
杭州ChIP免疫沉淀实验原理免疫沉淀技术Co-IP的应用有哪些？
免疫沉淀实验中抗体的选择非常关键，因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性：抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性，以避免与其他蛋白发生非特异性结合，导致假阳性结果。
2. 亲和力：抗体对目标蛋白的亲和力要足够高，以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型：单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性，而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证：选择已经过验证的抗体，这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息：选择信誉良好的抗体供应商，并查看供应商提供的技术数据和客户评价，以帮助做出决策。
免疫沉淀实验步骤：
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱
免疫沉淀纯化所得抗原量低是什么原因？
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验步骤通常包括以下几个关键环节：
1. 细胞裂解：首先需要收集细胞并裂解它们，以释放细胞内的蛋白质。这通常通过添加含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液来完成，以防止蛋白质降解。
2. 裂解物上清：裂解后的细胞混合物通常需要通过离心来去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞，从而获得上清。
3. 抗体的添加：将特定于目标蛋白的抗体加入到裂解物中。这些抗体将特异性地结合到目标蛋白上。
4. 免疫复合物的形成：抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。
5. 免疫复合物的捕获：使用Protein A/G结合的磁珠来捕获免疫复合物。
6. 洗涤：捕获免疫复合物后，需要用裂解/洗涤缓冲液多次洗涤，以去除未结合的蛋白质和其他污染物。
7. 洗脱：免疫复合物可以通过加入SDS样品缓冲液进行洗脱，这将导致抗体和抗原变性并从珠子上释放下来，或者使用低pH缓冲液进行温和洗脱，以保持蛋白质的天然构象。
8. 分析：洗脱后的样品可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法进行分析，以验证目标蛋白的存在和状态。
免疫沉淀技术RIP的应用有哪些？杭州ChIP免疫沉淀实验原理免疫沉淀技术RIP的实验设计。深圳Co IP免疫沉淀外包公司
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。
优点:
1. 特异性强：利用特异性抗体捕获目标蛋白，可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。
2. 灵敏度高：可以检测到低丰度的蛋白质，包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。
3. 应用范围广：适用于多种生物样本，如细胞裂解物、组织提取物和生物流体。
4. 生物学洞察深入：能够揭示蛋白质之间的相互作用网络，有助于理解细胞内的信号传递和调控机制。
5. 可与其他技术联用：如与质谱（IP-MS）联用，可以准确鉴定蛋白质及其相互作用伙伴。
缺点:
1. 对抗体依赖性高：需要高亲和力和高特异性的抗体，抗体的质量直接影响实验结果。
2. 可能存在非特异性结合：样本中的其他蛋白质可能与抗体或固相支持物发生非特异性结合，导致背景噪音。
3. 可能影响蛋白质的天然状态：裂解和沉淀过程可能会改变蛋白质的构象和功能。
4. 实验重复性：需要多次实验来确保结果的可重复性和可靠性。
5. 样品处理：需要避免样品降解和非特异性结合，这可能需要使用蛋白酶抑制剂和适当的缓冲液条件。
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通过离心或其他分离方法，可以将这些免疫复合物从样本中分离出来，从而得到纯净的目标蛋白。蛋白免疫沉淀在生命科学研究中有着普遍而重要的应用。在蛋白质相互作用研究方面，它可以帮助科学家确定不同蛋白质之间的相互作用关系。通过免疫沉淀一个已知的蛋白质，然后分析与之结合的其他蛋白质，就能逐步构建起蛋白质相互作用网络，这对于理解细胞的生理功能和信号传导机制至关重要。在疾病研究中，蛋白免疫沉淀也发挥着关键作用。例如，通过检测患者样本中特定蛋白质的表达水平和修饰状态，可以为疾病的诊断和医疗提供重要线索。蛋白免疫沉淀磁珠利用抗体结合蛋白，磁珠助力，实现蛋白分离研究。温州IP免疫沉淀磁珠哪个公司好用Co-IP（免疫...
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