支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
支原体检测有哪些方法?温州细胞支原体预防试剂现货
支原体污染的来源主要包括以下几个方面:
1. 实验室环境中可能存在支原体污染源,如空气中的尘埃、其他培养物中的支原体污染等。
2. 实验操作人员的手部、衣物或皮肤表面可能携带支原体,造成细胞培养的污染。
3. 培养基、血清等培养材料如果受到支原体污染,也会导致细胞培养物受到污染。
4. 细胞交叉污染,即使用已受污染的细胞株进行培养时,可能会污染其他细胞。
5. 实验器材带来的污染,如未彻底消毒灭菌的实验器材。
6. 人体是某些支原体的正常菌群,因此操作人员的疏失也可能成为污染源。
7. 细胞库管理不善,造成实验室间的相互污染。
8. 细胞培养过程中的细菌、酵母或霉菌污染在光学显微镜下可见,但支原体污染在光学显微镜下通常不可见,必须通过特定的检测方法进行检测
温州支原体检测说明书一步法快速支原体检测的原理?
支原体检测实验方法需要考虑以下几个关键点:
1. 样本的采集与处理:确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范,避免交叉污染。
2. 实验操作的标准化:制定详细的实验操作流程,包括样本接种、培养条件、观察时间点等,以保证实验的可重复性和准确性。
3. 使用适当的培养基:根据支原体的特性选择合适的培养基,如支原体肉汤4. 培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等,并确保培养基的灵敏度和特异性。
5. 设置对照组:实验中应包括阳性对照和阴性对照,以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。
细胞库支原体检测的必要性主要体现在以下几个方面:
1. 确保细胞库的质量与安全性:细胞库的建立需要为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。支原体检测是确保细胞库中细胞质量的重要环节。
2. 符合监管要求:支原体检测是生物制品安全性监管的一部分,全球范围内的药典、法规和指导文件中都有支原体检测的相关说明。
3. 避免对生物制品的影响:支原体污染可能会影响生物制品的安全性和有效性,因此需要通过检测来避免这种风险。
4. 维护细胞培养的稳定性:支原体是真核细胞和干细胞培养中最常见的问题之一,它们可以改变细胞的代谢、减缓增殖速度,甚至引起染色体畸变。
5. 预防交叉污染:由于支原体可以通过气溶胶和微粒污染实验室其他区域,支原体检测有助于预防交叉污染的发生。
6. 保障数据的可靠性:支原体污染可能会影响实验结果的准确性,因此定期进行支原体检测有助于保障研究数据的可靠性。
7. 常规监测的重要性:支原体应成为细胞培养实验室的常规监测项目,以确保细胞培养的质量和安全。
8. 遵守药典规定:根据中国药典的规定,每8~12代细胞培养物应进行支原体检查,以符合规定。
支原体去除之后对细胞转染有无影响?
细胞被支原体污染后可能会出现以下几种情况:
1. 生长速度变慢:支原体污染的细胞生长速度可能会减慢,甚至停止生长。
2. 形态改变:部分细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。有些细胞在支原体污染后,形态变化可能不明显,但有些细胞可能会出现体积增大、细胞碎片增多等现象。
3. 培养液pH变化:支原体污染的细胞可能导致培养液pH值变化明显,更换培养液后几小时内变酸(颜色变黄)。
4. 细胞间隙出现膜状沉积:在某些情况下,细胞与细胞间隙可能出现膜状沉积,影响细胞的正常生长和传代。
5. 细胞功能受损:支原体污染可能会影响细胞的代谢和功能,如影响细胞蛋白质、DNA、RNA的合成。
6. 染色体畸变:支原体污染可能会导致细胞染色体断裂、数目减少,出现双着丝点染色体、环状染色体等异常。
7. 免疫细胞产量受影响:对于巨噬细胞等免疫细胞的培养,支原体污染可能会抑制干扰素的合成和降低其活性。
8. 细胞培养环境的污染:污染的细胞可能成为实验室的污染源,影响工作区域、培养箱和液氮罐等。
9. 实验结果的不确定性:使用被支原体污染的细胞进行实验可能会得到不准确的结果,影响科研的可靠性。
支原体污染之后是直接丢弃还是重新培养?苏州支原体检测试剂多少钱
支原体去除的实验步骤?温州细胞支原体预防试剂现货
细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:
1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
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