1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备（1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。注意：未使用的储存液保存在-20°C，避免反复冻融。（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5µM的工作液。注意：工作液的**终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找比较好条件。
2.悬浮细胞染色（1）悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞比较好培养时间不同。（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。（5）重复（3），（4）步骤两次以上。 PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。青海水溶荧光染料
纳米粒子纳米颗粒是指尺寸在1到100纳米之间的颗粒。由于它们的小尺寸，纳米粒子通常用于不同类型的细胞和组织的荧光成像。当今生物成像中常用的一些纳米材料包括碳点、贵金属纳米颗粒、聚合物点、量子点和荧光掺杂二氧化硅等。在成像中，与其他分子荧光团和探针相比，纳米颗粒/纳米材料具有多种优势，使其成为理想的选择。除了提高亮度外，纳米粒子是惰性的并且往往分布均匀，这有助于在成像过程中获得更好的结果。此外，与各种分子荧光团相比，纳米颗粒和纳米材料没有细胞毒性，并且不受非特异性结合问题的影响。由于这些特性，大多数荧光纳米颗粒（染色纳米颗粒）可以内化到细胞/组织中，并容易靶向给定部位。青海水溶荧光染料Super Fluor活化酯（与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。
羰花青染料***用作Di来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiI及其类似物是**常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI***用于测定LDL和HDL等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神经元示踪[2]。
三、流式细胞仪分析1、取对数生长期的细胞，接种到孔板，过夜培养。2、如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间后，收集细胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重悬细胞，37℃避光孵育15min或更长时间。【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，Rhodamine123工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。4、用流式细胞仪检测。
四、实验案例1、取对数生长期A549细胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培养基）,37℃培养箱培养4-24h待其贴壁，以便后续实验操作.2、弃掉培养液，PBS洗涤两次.3、用培养基（无血清）稀释Rh123母液制备1～20µMRh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。4、将Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分钟.5、去除Rh123工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.6、荧光显微镜观察. 花青类荧光染料属于共振染料，其特征在于具有离域电荷的氮原子（两个氮原子）之间的聚甲炔染料。
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外，荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其应用于荧光探针，细胞染色等。重庆荧光染料红色
动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。青海水溶荧光染料
南京星叶生物科技有限公司各类荧光染料
多肽、蛋白、抗体标记：5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像：脂溶性荧光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性荧光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近红外I区/II区荧光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO 青海水溶荧光染料
