支原体去除试剂使用后,对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体,而对真核细胞几乎没有影响。然而,某些情况下,去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响,尤其是在去除剂作用期间。此外,如果去除剂的效果不彻底,可能会导致细胞再次被支原体污染。
需要注意的是,某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解,从而释放出支原体的DNA,这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此,在去除支原体后,建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测,以确保检测结果的准确性。
什么样的客户需要定期检测支原体污染?南京细胞支原体检测试剂价格
预防细胞培养过程中的支原体污染至关重要,因为一旦发生污染,可能会严重影响实验结果和细胞的生长。以下是一些有效的预防措施:
1. 无菌操作:始终在无菌条件下进行细胞培养操作,包括使用无菌的移液器、手套和其他实验室器材。
2. 个人防护:穿戴适当的个人防护装备,如实验服、手套和口罩,以减少污染的风险。
3. 细胞培养室的清洁:保持实验室和细胞培养室的清洁,定期进行消毒处理。
4. 培养箱的维护:定期清洁和消毒CO2培养箱,避免飞溅和溢出,并维持严格的清洁计划。
5. 使用无支原体污染的试剂:使用经过检测确认无支原体污染的培养基、血清和其他添加物。
6. 细胞的检测:定期对细胞进行支原体污染的检测,尤其是在引入新的细胞系或传代细胞之前。
7. 培养基和试剂的过滤:使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤所有细胞培养用液体,以阻止支原体的通过。
8. 使用抗*素预防:虽然抗*素不能作为常规预防手段,但在某些情况下,可以考虑使用抗*素作为预防措施,尤其是在高风险操作中。
深圳细胞支原体检测服务支原体检测实验的设计?
支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基。在细胞培养中,支原体污染是常见的问题,因此需要对细胞和培养基进行检测。细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床用细胞等都需要进行支原体检查,这通常包括培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)。同时,病毒类疫苗的病毒收获液、原液也采用培养法检查支原体,必要时,也可以采用指示细胞培养法筛选培养基。
此外,支原体检测的培养基推荐使用支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基等,这些培养基可用于检测药品和生物制品中的支原体。在进行支原体检测时,需要取培养物样品接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上。
因此,支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基,具体取决于检测的目的和方法。
qPCR法,即定量聚合酶链式反应(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面:
1. 快速定性检测:qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。
2. 临床样本检测:qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体,具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 监管要求:基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发,其性能满足或超出监管要求,如10CFU/mL。
4. 药物质量控制:qPCR法提供早期检测支原体污染的方法,适用于药物质量控制,具有快速、高度特异性、灵敏性,并符合国际准则。
支原体去除的实验步骤?
细胞培养中如果污染了支原体,会有以下几种影响:
1. 细胞生长受影响:支原体污染会导致细胞生长速度减慢,甚至停止生长。细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。
2. 细胞形态变化:虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显,但有些细胞会出现体积增大,细胞碎片增多,培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。
3. 代谢和功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢和功能,例如培养液中的精氨酸被大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。
4. 实验结果受影响:使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果,因为支原体会抑制细胞生长,导致染色体畸变,细胞膜抗原性改变,细胞复苏后存活率降低等。
5. 细胞培养环境的污染:一株污染的细胞可能成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染,进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染。
6. 科研结果的重复性问题:由于支原体污染,某些实验结果可能能在支原体阳性的细胞中得到,导致科研结果的重复性受到影响
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根据提供的信息,支原体去除试剂是一种混合制剂,通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果,同时对细胞无伤害。它被设计为对细胞毒性小,不影响后续的细胞实验,包括细胞活力检测和细胞转染等。这表明使用支原体去除试剂去除支原体后,理论上不应该对细胞的转染效率产生负面影响。
此外,支原体污染本身会对细胞的转染效率产生负面影响。研究表明,与未污染的细胞相比,支原体污染的细胞转染后具有较低的基因表达水平。因此,去除支原体后,可以预期细胞的转染效率会得到改善,因为移除了影响细胞正常功能的污染物。
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