糖蛋白性能测试：O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性，需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO，这些蛋白携带多达11个O-聚糖，这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理，而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖。海南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率（图3）。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽，而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具选择性的氨基酸序列偏好，此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外，ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解，如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品（T184-S199和T200-H204;图2b和d），而在ImpaRATOR消化的样品中，具有漏裂的相应肽（S184-H204）的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率，但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构，包括唾液酸化物种。例如，条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较，在OpeRATOR中，必须去除唾液酸才能产生酶活性，这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。天津PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisOpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中；
使用Genovis的OpeRATOR图谱O-聚糖位点对依那西普进行LC-MS分析：依那西普是一种 Fc 融合蛋白，具有高度 O-糖基化的铰链区域。将依那西普与OpeRAT一起孵育，并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促红xibao生成素 （EPO） 是一种具有单个 O-糖基化位点的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO进行去唾液酸化后，用OpeRAT消化天然蛋白，并通过反相LC-MS分析所得蛋白质片段。O-糖基化的位点可以通过识别OeRATOR消化位点直接推断出来。为了获得良好性能，需要去除唾液酸助剂，因此购买中包括2000个单位（如果SialEXO冻干）。1. 用于方法开发的灵活产品形式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的，而该酶在N-聚糖上没有活性。OpeRATOR和SialEXO处理后，O-糖基化蛋白被消化成携带O-聚糖的肽。消化发生在O-糖基化位点的N端。
Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（O-糖苷酶），可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖，用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶），可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸，因此，由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干，用于去除α2-3，α2-6和α2-8连接的唾液酸，与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。Genovis测试了 SialEXO 冻干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制剂上的性能。
我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。曲妥珠单抗中半乳糖损失的LC-MS数据，进行了释放的N-聚糖分析。天津PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
而用其他岩藻糖酶处理部分去除岩藻糖或根本没有去除。海南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力，用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时，西妥昔单抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分钟内完全去除，PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件，将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化，分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。海南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis...
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【详情】当在完整状态下进行分析时，EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 Omni...
【详情】Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结...
【详情】FucosEXO中的酶在大肠杆菌中表达，带有His标签，分子量为87 kDa和64 kDa。Fuco...
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