一种发光杂环化合物,存在于生物发光的生物体中,如萤火虫。在含有三磷酸腺苷的情况下,通过荧光素酶氧化脱羧产生光。可用于荧光素酶生物发光成像和细胞高通量筛选应用。D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。反应原理:首先,在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应,接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物***成像系统配套使用,用于标记LUC基因后的体内***荧光检测。D-荧光素游离酸(D-Luciferin,freeacid)、D-荧光素钾盐(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-荧光素钠盐(D-Luciferin,sodiumsalt),钾盐、钠盐的形式是**通用的,因为它们都易溶于水。钾盐也是***动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。神经荧光染料外泌体
除了以上应用,吲哚菁绿还可以用于生物识别和药物输送。在生物识别中,吲哚菁绿可以与特定的生物分子结合,从而实现对这些分子的检测和定量分析。这项技术在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用前景。此外,吲哚菁绿还可以作为药物输送系统的一部分,将药物包裹在其分子结构中,通过近红外光***释放药物,实现靶向***。吲哚菁绿作为一种多功能的荧光染料,在医学和生物领域具有广泛的应用前景。其绿色溶解度的优良性能,使其能够在水溶液中快速溶解,为其在医学影像学、光热***、生物识别和药物输送等方面的应用奠定了基础。随着科学技术的不断进步,相信吲哚菁绿在未来将发挥更大的潜力,为人类健康事业做出更大的贡献。吲哚菁绿作为一种荧光染料,在医学影像学中的应用是**为突出的。它可以通过静脉注射进入人体血液循环系统,并在近红外激光的照射下发出荧光信号。这种荧光信号可以被**的显像设备捕获和记录,从而形成高分辨率、高对比度的影像。这样的影像可以帮助医生观察和分析血管、淋巴系统以及**等病变的情况,提供重要的诊断依据。神经荧光染料外泌体Super Flour 系列在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。
荧光染料***用于生物学和医学研究中,如流式细胞术、荧光显微镜和免疫组化等,其中荧光淬灭是一个关键的考量因素,因为它直接影响到实验结果的可靠性和准确性。FITC(异硫氰酸荧光素)是一种常用的绿色荧光染料,具有较高的荧光量子产率和激发效率。然而,FITC的一个主要缺点是容易受到环境因素的影响,如pH值、温度、溶剂和离子强度等,从而导致荧光淬灭。此外,FITC的光稳定性相对较低,长时间的光照会导致其荧光强度降低。CY5.5是一种远红外荧光染料,具有较长的激发和发射波长,因此适用于多色荧光标记和深组织成像。CY5.5相对于FITC来说,具有更好的光稳定性,不易受到环境因素的影响。此外,CY5.5的荧光量子产率也较高,使其在荧光标记实验中表现出色。AlexaFluor647是另一种常用的红色荧光染料,具有与CY5.5相似的长波长激发和发射特性。AlexaFluor647的优点是光稳定性较好,可以承受长时间的光照而不易淬灭。此外,它在多种溶剂和pH值范围内都能保持稳定的荧光性能,因此在复杂的生物样本中表现出色。
南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列),质优价廉。
Hoechst33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。用于细胞核染色时,推荐的Hoechst33258工作浓度为0.5-10μg/ml。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:Hoechst33258对人体有害,请注意适当防护。荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(P0126)可以向碧云天订购。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作注意事项:Hoechst33342对人体有一定刺激性,请注意适当防护。荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料,它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程(1)将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中(也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基)。(2)在37℃培养细胞10~20分钟。(3)用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。(4)用535nm激发波长,615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:PI对人体有刺激性,请注意适当防护。罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。中国台湾石家庄荧光染料
D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。神经荧光染料外泌体
三、流式细胞仪分析1、取对数生长期的细胞,接种到孔板,过夜培养。2、如果要进行药物刺激,在细胞中加入感兴趣的药物进行干预,继续培养一定时间后,收集细胞,PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重悬细胞,37℃避光孵育15min或更长时间。【注意】:由于细胞种类和实验体系不同,Rhodamine123工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。4、用流式细胞仪检测。
四、实验案例1、取对数生长期A549细胞接于六孔板(1*106+2mlDMEM培养基),37℃培养箱培养4-24h待其贴壁,以便后续实验操作.2、弃掉培养液,PBS洗涤两次.3、用培养基(无血清)稀释Rh123母液制备1~20µMRh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。4、将Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分钟.5、去除Rh123工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.6、荧光显微镜观察. 神经荧光染料外泌体