钙成像技术是一种监测组织内钙离子浓度的方法,通过使用钙离子指示剂,科学家可以观察神经信号在神经网络中的传递过程,并了解神经元活动与内部钙离子浓度的关系。在静息状态下,大部分神经元的胞内钙离子浓度为50-100nM,而当神经元活动的时候,胞内钙离子浓度能上升10-100倍,增加的钙离子对于含有神经递质的突触囊泡的胞吐释放过程必不可少。钙成像是一种生物医学技术,主要用于观察和记录细胞内钙离子浓度的变化。钙离子是细胞内重要的信号分子,其浓度的改变可以影响细胞的生理功能和病理状态。因此,钙成像技术对于研究细胞生物学、神经科学、心血管医学等领域具有重要意义。钙成像系统在自由行为动物上对钙离子动态进行单细胞分辨率级别的持久成像。上海超微显微钙成像口碑好
功能光学成像技术的发展使研究脑区和神经元的内部工作成为可能。随着功能光学成像技术的发展,神经学家们已经可以研究脑区和神经元内部的工作情况。功能钙成像技术就是其中之一,其主要原理是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来——通过荧光染料信号的改变反映细胞内游离钙离子浓度,以此表示细胞的功能状态。目前它被广泛应用于实时监测一群相关神经元内钙离子的变化,从而判断其功能活动。该技术的出现使得科学家可以亲眼目睹神经信号在神经网络之中时间和空间上的传递穿梭。美国神经细胞钙成像nVoke钙成像技术利用钙离子流的优势在活神经细胞上直接可视化钙信号。
钙离子在很多生理活动中都发挥着重要作用,除了在肌肉细胞收缩中扮演着重要的角色,钙离子也是神经元活动的重要“风向标”之一:当神经元膜电位发生去极化,产生的动作电位传导到神经元轴突末梢时,细胞膜上的电压门控钙离子通道打开,大量钙离子内流,包含神经递质的囊泡由突触前膜释放至后膜,下游神经元就得以接受到上游的信号。因此,钙离子成像可以追踪神经元动作电位,从而帮助我们了解神经元集群的活动,可以用于感知觉,学习记忆,社会性行为等各种各样的研究中。
随着功能光学成像技术的发展,神经学家们已经可以研究脑区和神经元内部的工作情况。功能钙成像技术就是其中之一,其主要原理是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来——通过荧光染料信号的改变反映细胞内游离钙离子浓度,以此表示细胞的功能状态。目前它被广泛应用于实时监测一群相关神经元内钙离子的变化,从而判断其功能活动。该技术的出现使得科学家可以亲眼目睹神经信号在神经网络之中时间和空间上的传递穿梭。功能光学成像技术的发展使研究脑区和神经元的内部工作成为可能。神经方面科学迫切需要一种能够兼顾全局和微观的新型钙成像技术。
钙是机体的组成元素之一。钙离子作为电流载体维持细胞内外的电化学梯度,同时在细胞的生命活动中扮演着重要角色。作为第二信使,钙参与细胞周期、细胞代谢、细胞分化、坏死、凋亡等等许多重要的生理过程。细胞内的钙离子水平通常很低,一般胞浆中的自由钙约为100nM。胞内的钙可被各种亚细胞器所贮存,据文献报道:其中约50%位于细胞核,30%位于线粒体,14%位于内质网,5%位于胞膜上,1%位于胞质内,且因为钙离子易与磷酸和碳酸复合物形成不溶物,故游离钙只占[1]。细胞可以通过钙内流、内钙释放及膜系统上的降钙蛋白等一整套完整的监控系统来维持细胞内钙的内稳状态。例如与钙内流相关的通道例如电压门控性钙离子通道VDCC、受体活跃的通道RACC;与内钙释放相关的受体如内质网上的IP3受体;以及降钙相关的脂膜及线粒体上的主动运输的钙泵系统等等[2]。近20年来钙的荧光成像及测定技术发展迅速,出现了各种各样的钙荧光指示剂,结合不断发展的显微成像系统,我们可以对活细胞的钙离子进行测定及成像,进一步揭示其生理机制及相关疾病的发病机制。钙成像的荧光指示剂钙成像的荧光探针一般均为Ca2螯合剂EGTA,APTRA,BAPTA的衍生物,它们可以结合钙离子从而显示一个光谱响应。功能钙成像技术是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来,通过荧光染料信号的改变反映细。美国神经细胞钙成像nVoke
通过钙成像技术检测活动动物记录神经元的活动。上海超微显微钙成像口碑好
单光子显微技术是较成熟的荧光显微技术,但由于其使用的激发光波长较短,成像深度有限;能量较大,会造成对荧光物质的漂白,光毒性严重。激光共焦扫描显微镜由于共焦显微镜的孔径很小,实现样本三维成像要逐点扫描,成像速度慢,对样本损害大,很难用于长时间活细胞成像。而宽场显微镜能够很好地实现实时动态成像,光漂白小,因而较早应用于活细胞内的实时检测,但宽场显微镜由于离焦信号的干扰,难以实现多维成像。Derrick想重点介绍一下较为常用的观察设备——双光子荧光显微镜(Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy)。双光子显微成像技术是近些年发展起来的结合了共聚焦激光扫描显微镜和双光子激发技术的一种新型非线性光学成像方法,采用长波激发,能对组织进行深层次成像。常用的比较好激发波长大多位于800-900nm,而水、血液和固有组织发色团对这个波段的光吸收率低,此外散射的激发光子不能激发样品,因此背景第,光损伤小,适用于在体检测。双光子荧光成像技术能准确定位细胞内置入的微电极位置,从而观察胞体、树突甚至单个树突棘的活性。研究者可完整的观察神经组织的分辨荧光图像,甚至可以分辨神经细胞单个树突棘中的钙分布。上海超微显微钙成像口碑好