近年来,随着玻璃化冷冻技术的不断发展,成熟卵母细胞纺锤体的冷冻保存研究取得了进展。研究表明,采用玻璃化冷冻法冷冻保存的成熟卵母细胞,在解冻后其纺锤体和染色体的形态及功能均能得到较好的保持。这主要得益于玻璃化冷冻过程中避免了冰晶形成对细胞的损伤,以及冷冻保护剂对细胞的有效保护。然而,值得注意的是,尽管玻璃化冷冻法在提高解冻存活率和妊娠成功率方面取得了成效,但仍存在一些问题。例如,冷冻过程中纺锤体的微管结构可能受到低温的影响而发生解聚,导致染色体分离异常。此外,冷冻保护剂的毒性也可能对卵母细胞造成一定的损伤。为了克服这些问题,研究者们进行了大量的实验和优化工作。例如,通过改进冷冻保护剂的配方和浓度,降低其对细胞的毒性;通过优化冷冻速率和程序,减少冷冻过程中对细胞的机械损伤;以及通过筛选和评估不同冷冻载体和保存时间对卵母细胞冷冻效果的影响,寻找好的冷冻保存条件。纺锤体微管的动态变化是细胞对外界刺激响应的一部分。无损观察纺锤体胚胎发育

液晶偏振光显微镜是一种将液晶可变减速器、电子成像及数码成像技术结合起来的成像系统,能够观测到具有双折性特征的细胞结构,如纺锤体和透明带。Polscope成像系统无需对细胞进行固定和染色,因此能够评估卵母细胞的质量与纺锤体、透明带等的相关性。在纺锤体卵冷冻研究中,Polscope成像系统可用于实时监测冷冻过程中纺锤体的形态变化,评估冷冻保护剂的效果和冷冻速率对纺锤体的影响。此外,解冻后也可利用Polscope成像系统评估纺锤体的恢复情况和稳定性,从而筛选出高质量的卵母细胞进行后续操作。纺锤体实时成像纺锤体卵冷冻研究纺锤体形态的变化反映了细胞分裂的不同阶段。

纺锤体是卵母细胞在减数分裂过程中形成的一种微管结构,负责精确分离染色体。然而,纺锤体对环境温度、渗透压等外部条件极为敏感,在冷冻保存过程中容易发生损伤,导致染色体分离异常,进而影响卵母细胞的发育潜力和受精后的胚胎质量。因此,如何有效监测和评估冷冻过程中纺锤体的变化,成为纺锤体卵冷冻研究的重要课题。纺锤体实时成像技术的出现,为这一问题的解决提供了可能。纺锤体实时成像技术主要利用高分辨率显微镜结合荧光标记技术,对卵母细胞内的纺锤体进行实时、动态的观察和记录。常用的荧光标记方法包括使用绿色荧光蛋白(GFP)标记微管蛋白,以及利用特定抗体对纺锤体相关蛋白进行染色。通过这些方法,研究者可以清晰地观察到纺锤体的形态、位置、动态变化等信息,从而准确评估冷冻过程中纺锤体的稳定性和完整性。
纺锤体生成
在含中心体的细胞中,纺锤体的生成开始于细胞分裂前初期 - 即在细胞核膜分解(Nuclear Envelope Breakdown, NEB)之前。初期的结构为两个**的以中心体为核的星状体(asters)。当细胞核膜分解后,染色体和星状体发生一系列复杂的互动反应。**终结果为所有的染色体在纺锤体的**(赤道板,)排列整齐,每两条染色体有一个着丝点,每一个着丝点被一束极性相同的微管(通常称为纺锤丝)附着。此时细胞处于分裂中期,纺锤体生成完毕。实验证明,中心体在这个过程中的作用不是必需的。动物细胞在中心体被激光捣毁后仍旧能够筑构纺锤体,但其位置通常不在细胞的大致几何中心,其后的胞质分裂也会受严重影响。纺锤体 [1]
在不含中心体的细胞中,纺锤体的生成是由染色体本身主导的。此过程由一小分子量的GTP连接蛋白(Ran GTPase)控制。细胞核分解后,纺锤丝由染色体周围生成。其后这些纺锤丝会在动力分子与为微管动力的合作影响下自动排列为极性相反大致数目相同的两组。每组的极性相对于一组着丝点。同时在微管远端的动力蛋白 dynein 会将这些微管束集中到一点,形成纺锤极区(Spindle Polar Zone)。与此同时,染色体会自动在赤道板排列整齐。纺锤体生成完毕。 纺锤体微管的正极朝向细胞两极,负极则靠近染色体。

如何观察纺锤体呢?
在普通光学显微镜下,人类卵母细胞是半透明的,无法对纺锤体的结构进行观察和分析。传统方法是用一种特异的DNA荧光染料对卵母细胞染色,在紫外光下可显示纺锤体,这种免疫荧光方法对卵母细胞有损伤,不能应用于临床。为了更好的观测纺锤体,美国海洋生物学实验室的R.Oldenbourg等利用纺锤体的双折射特性,开发出偏振光显微镜。现今,偏振光显微镜已经发展成为一种无创性的观察和分析纺锤体动态结构的显微观测系统,我们也叫它纺锤体观测仪。它不仅能对双折射性纺锤体信号的有无进行定性分析,还能对信号的强弱进行定量分析。 纺锤体微管网络的动态变化揭示了细胞分裂过程中分子层面的奥秘。MII期纺锤体卵质量评估
纺锤体微管的聚合与解聚受到多种酶的调控。无损观察纺锤体胚胎发育
纺锤体
特殊细胞器
纺锤体(Spindle Apparatus),形似纺锤,是产生于细胞分裂前初期(Pre-Prophase)到末期(Telophase)的一种特殊细胞器。其主要元件包括微管(Microtubules),附着微管的动力分子分子马达(Molecular motors),以及一系列复杂的超分子结构。一般来讲,在动物细胞中,中心体是纺锤体的一部分。高等植物细胞的纺锤体不含中心体。而***细胞的纺锤体含纺锤极体(Spindle Pole Body),一般被视为中心体的同源细胞器。
纺锤体是由大量微管纵向排列组成的中部宽阔、两级缩小的如纺锤状的结构。在细胞分裂中,纺锤体对卵母细胞染 色体的运动、平衡、分配以及极体排出都非常重要。卵母细胞纺锤体的异常会导致减数分裂异常,产生非整倍体的卵母细胞或者成熟阻滞的卵母细胞。 无损观察纺锤体胚胎发育
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