注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定比较高信号检测时间和信号平台期。保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长。 注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定比较好信号平台期和比较好的检测时间。荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别,两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看,钾盐的使用率远高于钠盐,尤其是体内实验。两者功效相同。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其应用于荧光探针,细胞染色等。福建荧光染料DID
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记,对于蛋白抗体的标记,可以通过简单的混合反应来完成结合,下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果,请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0,应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL,标记效率会**降低。为获得比较好标记效率,建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中,和铵离子,否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。海南荧光染料荧光素酶D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。
荧光染料***用于生物学和医学研究中,如流式细胞术、荧光显微镜和免疫组化等,其中荧光淬灭是一个关键的考量因素,因为它直接影响到实验结果的可靠性和准确性。FITC(异硫氰酸荧光素)是一种常用的绿色荧光染料,具有较高的荧光量子产率和激发效率。然而,FITC的一个主要缺点是容易受到环境因素的影响,如pH值、温度、溶剂和离子强度等,从而导致荧光淬灭。此外,FITC的光稳定性相对较低,长时间的光照会导致其荧光强度降低。CY5.5是一种远红外荧光染料,具有较长的激发和发射波长,因此适用于多色荧光标记和深组织成像。CY5.5相对于FITC来说,具有更好的光稳定性,不易受到环境因素的影响。此外,CY5.5的荧光量子产率也较高,使其在荧光标记实验中表现出色。AlexaFluor647是另一种常用的红色荧光染料,具有与CY5.5相似的长波长激发和发射特性。AlexaFluor647的优点是光稳定性较好,可以承受长时间的光照而不易淬灭。此外,它在多种溶剂和pH值范围内都能保持稳定的荧光性能,因此在复杂的生物样本中表现出色。
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二、***成像分析:D-荧光素,钾盐,D-PBS,不含钙、镁1、配制溶液使用无菌D-PBS(w/oCa2+;Mg2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/ml),0.22µm滤膜过滤除菌(避光),分装后于-20℃或-80℃冷冻保存,避免反复冻融。使用时4℃融化,实验前平衡至室温(避光)2、注射量取决于注射方式,具体如下:注射方式剂量静脉注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液腹腔注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液肌肉注射(27gauge针头)50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液鼻内注射(pipette)50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液3、注射入体内10-20min(待光信号达到**强稳定平台期),再进行成像分析D-荧光素钾盐南京星叶生物科技有限公司。
一种发光杂环化合物,存在于生物发光的生物体中,如萤火虫。在含有三磷酸腺苷的情况下,通过荧光素酶氧化脱羧产生光。可用于荧光素酶生物发光成像和细胞高通量筛选应用。D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。反应原理:首先,在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应,接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物***成像系统配套使用,用于标记LUC基因后的体内***荧光检测。D-荧光素游离酸(D-Luciferin,freeacid)、D-荧光素钾盐(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-荧光素钠盐(D-Luciferin,sodiumsalt),钾盐、钠盐的形式是**通用的,因为它们都易溶于水。钾盐也是***动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。西安荧光染料蓝色
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细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,难以观察其形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前,已有多种研究细胞的技术,从光学显微镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段,然而,对于细胞实验新手来说,想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。
细胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料(见表2),它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。该系列染料进入细胞膜后,会在整个细胞膜上侧向扩散,在比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高,染色均一,荧光不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。目前DiD已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细胞、造血干祖细胞等。 福建荧光染料DID