D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外,荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。武汉荧光染料发射
异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC):FITC是应用*为***的一种荧光素,经激光激发后发出明亮的黄绿色荧光,*大发射波长为525nm。FITC的荧光强度受PH影响较大,常随着PH的降低而减弱,因此,在使用FITC时需格外注意溶液的酸碱度。a)电泳分离后的蛋白质检测(b)蛋白质和肽的微测序分析(c)使用毛细管区带电泳进行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟踪和检测(e)细胞和组织切片中的抗原检测(f)通过标记DNA片段进行细胞凋亡检测除了因其在水中的溶解性而易于用于偶联物制备外,异硫氰酸荧光素还具有明亮的荧光(由于偶联后的大消光系数和高量子产率),使其成为许多工艺的优先染料。在流式细胞术和免疫荧光显微术中,染料与各种抗体(一抗或二抗)结合,以检查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在肾功能中的作用等状态。作为荧光素的衍生物,异硫氰酸荧光素含有一个异硫氰酸酯反应基团,这有助于其对通常存在于生物分子中的动漫和巯基基团具有反应性。吉林脂溶荧光染料南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度***增强。它们具有很高的淬灭系数,偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中,这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散,导致在其比较好浓度条件下,将整个细胞染色。它们不同的荧光颜色:DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光),为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI可以分别与标准的FITC和TRITC滤光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激发,并且具有比DiI更长的激发和发射光波长,为标记细胞和组织的那些本身就具有本底荧光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示踪中非常有用,因为它们所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织,并且在红外光范围内,其本底荧光水平很低。
Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序:(1)用PBS或合适的缓冲液制备10~50µMHoechst33342染料。(2)将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中(可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基)。(3)在37℃培养细胞10~20分钟。(4)用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。(5)用带有350nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。脂溶性荧光染料cy3、cy5、cy7等。
其他细胞结构常用染料生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色细胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。鬼笔环肽(Phalloidin)是细胞骨架的染色神器,罗丹明标记的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可将细胞染成橙红色,DAPI与Phalloidin染色液是研究细胞形态变化时经常用到的两种共染的试剂,染色效果可见A1-E1用TRITC-鬼笔环肽(橙红)染色的细胞骨架免疫荧光图;A2-E2用DAPI(蓝色)染色的细胞核免疫荧光图;A3-E3合并的L929细胞免疫荧光染色图。是S100A16过表达或下调前后PDAC细胞形态的变化。动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。吉林脂溶荧光染料
羰花青染料用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。武汉荧光染料发射
细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,难以观察其形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前,已有多种研究细胞的技术,从光学显微镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段,然而,对于细胞实验新手来说,想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。
细胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料(见表2),它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。该系列染料进入细胞膜后,会在整个细胞膜上侧向扩散,在比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高,染色均一,荧光不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。目前DiD已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细胞、造血干祖细胞等。 武汉荧光染料发射