CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态,可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常,还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数,以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。
与人工操作相比,自动化系统更具客观性,精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5],这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比(Z%),和直线速度(VSL)的精子的百分比,与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的,而且没有显示临界值;高于临界值,妊娠率也不会进一步增加[7]。 Hamilton Thorne精子分析仪的操作简单易懂,用户无需具备专业知识也能够轻松上手使用。上海水生动物精子分析精子动力分析
精子分析仪工作原理
以灰度识别CASA为例,采用高分辨率的摄影技术与显微镜结合,**标本液化后吸入计数,通过显微镜放大后,用图像采集系统获取精子动、静态图像后输入计算机。根据设定的精子大小和灰度、精子运动移位及运动参数,对采集图像进行精子密度、活动力、活动率、运动特征等几十项检验项目动态分析,由计算机处理后,打印出“**分析检查报告以及精子动态特征分布图”。一次能对1000个精子进行动态检测分析,2-3分钟即可完成检测 [1]。
优点:
操作简便,用量少,检测速度快,重复性优于人工检测,并且能够快速、准确的测定精子密度、活力、精子分级等,还可提供精子运动状态的多种参数等。
缺点:
影响分析结果的因素较多,除**本身性质所含的固有误差外,不同的精子计数池的相对准确性和精确性可产生明显不一致的效果。 人精子分析精确温度控制CASA系统减少了人为因素对检测结果的影响,提高了检测的客观性和可重复性。
通过结果的生物学意义对结果质量进行评估当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向运动精子百分率上的相关性较低]。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较,其结果为:采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数;变异系数(CV)是29%活动精子比率的CV为24%平均路径速度(VAP)的CV为43∙85%。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术(授精IVF)的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能;同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。
精子手工计数原理及操作方法
1.原理:将精液用适当的稀释液作一定量稀释后,混匀注入计数池内计数,再算出每毫升精液中精子数。2.方法(按照***版第四版《全国临床检验操作规程》)1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。
3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式:精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml 男性精液检测主要依赖计算机辅助精子分析仪(computer assistant semen analyses,CASA)。
全自动的IVOS可以提供**快的分析速度以及高质量数据输出。可以使用一次性的和可重复的载玻片,深度从10um~100um。每次分析捕捉100帧图像,扫描速度每秒60帧。**的软件升级。
IVOS能提供:精确、客观、具有重复性的结果。高速分析,在60Hz下半秒扫描30帧,为实验室节省成本。 [1]主要功能IVOS自动精子活动、浓度、形态分析系统。Hamilton Thorne的CASA系统适用于临床、研究实验室、动物繁殖基地、水产业、制药公司等各种领域,成为了精液分析业的金标准。可以应用于包括人类、公牛、马、野猪、狗、兔子、老鼠、绵羊、山羊、鱼以及各种濒危动物。在TOX IVOS上有**的大鼠精液分析软件。 精子分析仪能分析与精子运动功能相关的各种参数。美国兔子精子分析ALH
Hamilton Thorne精子分析仪具有快速、高效、智能化的特点,能够满足用户对精子分析的多方面需求。上海水生动物精子分析精子动力分析
二、生化及免疫学检验:5、精浆肉碱测定【正常参考值】浓度为239.56±l05.59umol/L。【临床意义】精浆肉碱测定精浆中的肉碱主要由附睾分泌,其次是精囊。精浆中肉碱分为游离肉碱和乙酰肉碱二种,附睾中含高浓度的肉碱,主要与精子在附睾成熟时所需的能量来源有关。现认为精浆肉碱含量和果糖含量的变化,常反映附睾、精囊的功能。精浆肉碱及果糖含量正常,表明附睾、精囊功能正常。当肉碱含量高于正常的50%,而果糖含量降低,则提示精囊功能障碍,附睾功能正常;精浆肉碱约为正常含量的50%左右,果糖含量正常,说明附睾功能障碍,精囊功能正常;而肉碱急剧下降,果糖含量亦减少,表示精囊、附睾功能均发生障碍。6、抗精子抗体(AsAb)测定【正常参考值】阴性。【临床意义】AsAb检测对不育原因检查有重要临床意义。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb,可抑制精子的活动,干扰精子的运行,阻碍精子穿透及精卵结合,使受精发生障碍。即使已经受精,也可能影响发育中的胚胎,造成免疫性流产。不育夫妇AsAb阳性者占25%-30%,当精子输出管道受阻、睾丸损伤、炎症、附睾等生殖系***时,系精子外逸而产生的自身抗体。上海水生动物精子分析精子动力分析
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