芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测SiMoA通过将单个酶产生的荧光团限制在极小范围内，从而能够检测到非常低浓度的酶标记物体积（~50fL），导致荧光产物分子的局部高浓度。为了在免疫测定中实现这种定位，在第二步中，将珠子加载到一个阵列为离散的微升大小的孔（图1C）。本研究中使用的2毫米宽阵列有~50,000个孔，孔径为μm，孔深为μm。加载后的阵列在含有荧光酶底物液滴的情况下，用橡胶密封圈密封。Rissin等人，第3页将每个微球隔离在飞升反应室中。具有单一酶的微球标记的免疫复合物在50飞升的反应室中产生局部高浓度的荧光产物（图1D）。通过使用标准显微镜光学系统获取阵列的时间变化荧光图像，可以区分与单一酶分子相关的微球（“开启”孔）和不与酶相关的微球（“关闭”孔）；补充图1显示了“开启”和“关闭”孔的荧光直方图。成像阵列可以成千上万的单个免疫复合物同时检测。通过测定供试品中的蛋白质浓度来确定计算含有珠子和荧光产物的孔数相对于含有珠子的孔数（图1D）。使用SiMoA，浓度是因此，我们称SiMoA应用于检测单个免疫复合物为数字ELISA。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品，人人都用能得起的单分子检测；飞克级数字ELISA灵敏度
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我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原（PSA）和肿瘤坏死因子α（TNF-α），以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示。开发这些试验的关键参数是：珠子浓度和两种标记试剂（检测试剂和酶偶联物）的浓度。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先，足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看，100μL中有20万个珠子，每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度，在该浓度下，抗体-蛋白平衡导致高捕获效率（>70%）(D.M.R.，E.P.F.，D.C.D.，未发表工作）。 单分子蛋白数字ELISA试剂盒芯弃疾JX-8B简易版单分子ELISA检测产品，极速检测，检测用时只需要 15-30min！
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珠子以两种不同的方式读出。首先，在与100μMresorufin-阝-D孵育1小时后，用荧光板读出器以100μL方式读出珠子结合-半乳糖苷（RGP），一种荧光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板阅读器上，检测限为15fMofS阝G（图2）。其次，将珠子加载然后将RGP溶液密封到阵列的孔中，单个酶的信号被允许在反应室中积累，并每30秒获取一次荧光图像。实验结束时获取阵列的白光图像以识别含有珠子的孔（含有珠子的孔散射光与空井不同）。荧光图像用于确定哪些微球具有相关的结合酶（从时间变化的荧光图像中强度增加）。图2显示了微球中含酶的比例与总体S阝G浓度的关系的对数-对数图。检测到的比较低酶偶联物浓度为350飞摩尔（zM），并通过外推信号等于的酶浓度计算得出的检测限（LOD）。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品，超敏检测，低至可测试到亚皮克级；
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超敏：芯弃疾.数字ELISA，与Simoa同样的检测方案，将检测结果二维化，使用成像方式，可精确量检测区多少个微球载体上发生免疫反应，具有阳性荧光信号，理论可达fg级；使用常规ELISA试剂，测试IL-6等演示指标，也可轻松达到亚pg级（0.2-0.5pg/mL)；使用显微图像处理方法，得到数万个磁珠中，阳性的个数和亮度，建立标准曲线，得到待测指标的浓度。极低浓度时，检测信息为数字化信号，有效提高检测灵敏度到0.2 pg/ml级； 芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品，多重检测，同一样本就能测试2-6项指标；科研场景用数字ELISA配置灵活
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动力学上，对于200,000个微球分散在100μL中，珠子之间的平均距离约为80μm。大小为TNF-α和PSA（分别为17.3和30kDa）的蛋白质将在不到1min的时间内扩散80μm。表明，在2小时的孵育过程中，蛋白质分子的捕获不会受到限制动力学上。其次，必须有足够的珠子被加载到阵列上以限制泊松噪声。200,000个珠子加载到50,000孔阵列中，通常会导致20,000–30,000个微球被困在1mL孔中。对于典型的背景信号为1%活性微球（见下文），这种装载导致背景信号为200-300个活性微球检测到，对应于泊松噪声的可接受变异系数（CV）为6-7%。第三，过高的微球浓度可能导致：a）非特异性结合增加，降低信噪比；以及b）分析物与微球的比例过低，导致活性微球的比例过低，从而导致泊松噪声引起的高CV。这些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿；可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人第5页因素意味着每100μLoftest样品含有20万到100万颗珠子是比较好的数字ELISA。同时，为了获得可接受的背景信号（1%）和泊松噪声）。 飞克级数字ELISA灵敏度
