二代测序——微生物基因组应用领域
环境领域
环境微生物监测:对土壤、水体等环境中的微生物群落进行监测。通过二代测序微生物基因组,可以了解环境微生物的多样性和功能。例如,在监测土壤污染修复过程中,对土壤微生物基因组进行测序,可以发现能够降解污染物的微生物种类和相关功能基因,评估修复效果。
生态系统功能研究:研究微生物在生态系统中的功能,如碳、氮循环等。微生物基因组中的功能基因参与了这些生态过程。例如,通过测序可以找到参与氮固定的微生物基因,了解在不同生态系统(如农田、森林等)中这些基因的分布和活性,从而更好地理解生态系统的氮循环机制。 二代测序是为了改进一代测序通量过低的问题而出现的。天津嘉安健达二代测序检测
微生物基因组——数据组装后的分析步骤
基因预测:利用软件如Prokka等进行基因预测。这些软件会根据微生物基因组的序列特征,识别出可能的基因区域。例如,通过寻找开放阅读框(ORF)来确定基因的位置和范围。对于细菌基因组,由于其基因结构相对简单,基因预测的准确性相对较高。在预测过程中,软件会考虑密码子偏好性等因素,这是不同微生物在长期进化过程中形成的对特定密码子使用频率的差异。
基因功能注释:将预测出的基因与公共数据库(如KEGG、Swiss-Prot等)进行比对,以确定基因的功能。例如,通过比对KEGG数据库,可以了解基因在代谢通路中的作用。如果一个基因与数据库中某个已知的参与糖代谢的基因高度相似,那么就可以推测这个基因在微生物的糖代谢过程中可能发挥类似的功能。同时,还可以利用InterPro等工具对基因进行蛋白质结构域分析,进一步了解基因的功能特性。 苏州嘉安健达二代测序提供二代测序与Sanger测序相同吗?
二代测序的操作流程有哪些?
1.DNA提取与质检
· 纯净、足量、质量好的样本DNA是检测成功的基础(可以来源于血浆、新鲜组织等)
2.DNA处理→文库构建
· 得到统一长度区间+有接头的DNA片段
· 步骤:DNA打断→末端修复→片段筛选→加A尾→接头连接→PCR
3.靶向捕获
· 特定区域基因的定向检测
4.上机测序
· 根据通量情况选择测序仪
· 上样后机器完成
5.数据分析
· 初级分析:光强数据(不同荧光标记碱基)→序列信息(AGCT)
· 二级分析 多仪器自带
· 三级分析 vcf文件 可diy
二代测序——微生物基因组应用领域
医学领域
传染病诊断与溯源:对于引起传染病的微生物,二代测序可以快速鉴定病原体的种类和基因型。例如,在****期间,二代测序技术在快速确定的基因组序列、追踪病毒的传播路径等方面发挥了关键作用。通过对病毒基因组的SNP分析,可以区分不同的病毒株,有助于**防控措施的制定。
微生物与疾病关联研究:研究人体微生物组(如肠道微生物组、口腔微生物组等)与疾病的关系。例如,肠道微生物的基因组测序发现,某些肠道微生物的基因变化与炎症性肠病(IBD)有关。通过比较IBD患者和健康人的肠道微生物基因组,发现了一些可能与疾病发***展相关的功能基因,如参与免疫调节和代谢的基因。 基因组重测序是二代测序吗?
二代测序应用于蛋白组测序的常见方式①?
基于转录组测序间接推断蛋白信息
原理:由于蛋白质是由mRNA翻译而来,先利用二代测序技术对转录组(主要是mRNA)进行高通量测序,获得基因转录水平的信息。基于中心法则中mRNA和蛋白质的对应关系,在一定程度上可以推测出相应蛋白质可能的表达情况。例如,通过分析mRNA的表达量高低,预估对应蛋白质的丰度趋势。如果某个基因的mRNA在样本中表达量很高,那么大概率其翻译产生的蛋白质在细胞内的含量也相对较高,但这只是初步推断,因为还存在翻译后调控等影响因素。
应用案例:在研究某种植物在不同生长阶段的蛋白表达变化时,先进行转录组测序,发现与光合作用相关的一些关键基因的mRNA在植物生长旺盛期表达量***上调,后续再通过其他蛋白检测手段验证到对应的光合作用相关蛋白质含量确实增多,这就体现了通过转录组测序间接了解蛋白表达趋势的可行性。 二代测序可以检测基因吗?湖南嘉安健达二代测序应用
二代测序实验与测序原理是什么?天津嘉安健达二代测序检测
二代测序——RNA甲基化的概念、作用和检测方法
RNA 甲基化概念及位置:RNA 甲基化是在 RNA 分子上添加甲基基团,其中 N6 - 甲基腺苷(m6A)是最常见的一种 RNA 甲基化修饰形式,它主要发生在 mRNA(信使 RNA)的腺嘌呤(A)残基上。
作用
1、影响 RNA 的稳定性:m6A 修饰可以影响 mRNA 的稳定性。例如,一些带有 m6A 修饰的 mRNA 更容易被降解,从而调控基因表达的时间和水平。2、调节 RNA 的剪接和翻译:m6A 修饰还能够调节 mRNA 的剪接过程,影响不同转录本的生成。同时,它也可以在翻译水平上发挥作用,影响蛋白质合成的效率。
检测方法
甲基化 RNA 免疫沉淀测序(MeRIP - Seq):这种方法主要是利用特异性识别 m6A 修饰的抗体,对 RNA 进行免疫沉淀富集,然后通过高通量测序来鉴定 m6A 修饰的位点和水平。 天津嘉安健达二代测序检测