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外泌体相关miRNA与肺病的诊断：miRNAs是一类含有20～25个核苷酸的非编码小RNA，能够通过下调或压制靶mRNAs来调节转录水平上的基因表达，目前非编码RNA被普遍发现存在于NSCLC患者外泌体中，参与一些病症的形成和演化过程。单个miRNA可能通过压制性复合物与多个mRNA结合，从而阻滞整个生物通路。因此，外泌体的miRNA具有成为NSCLC标志物的优势。Chen等在152例肺病患者的研究中初次报道了循环游离miRNA的表达，与75例健康者相比，发现了两种高表达的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等对27例肺病患者和9例健康人的血浆外泌体中12个miRNA的表达进行了评估，结果显示，12个一些病症相关的miRNA*在肺病患者中过度表达。Cazzoli等收集了30个血浆样本，发现4种外泌体miRNA（miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明显升高，用于筛查患者与健康人ROC曲线下面积（AUC）为0.908。离心除去细胞器，留取上清。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多。合肥正规外泌体提取试剂进货价

外泌体提取：尺寸排阻色谱。尺寸排阻色谱（Size-exclusionchromatography，SEC）是基于大小而非分子量实现分离大分子。该技术应用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根据其直径通过微球，半径小的分子需要更长的时间才能通过色谱柱的孔隙迁移，而大分子则从色谱柱中更早地洗脱。尺寸排阻色谱可以精确分离大小分子。此外，可以将不同的洗脱溶液应用于该方法。与离心方法相比，色谱分离已被证明具有更多优势，因为通过色谱分离的外泌体不受剪切力的影响，这可能会改变囊泡的结构。目前，SEC是一种普遍接受的分离血液和尿液中外泌体的技术。不过，该方法耗时较长，不适合大量样本处理重庆外泌体提取试剂供应商直接把外泌体从尿液中沉降下来，无须分离培养人尿液来源细胞并收集培养基。

外泌体（exosomes）是活细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的膜性囊泡，来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)，直径约为30-150nm，密度在1.13-1.21g/ml，天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等体液中，同时外泌体也存在于组织和细胞间隙中。人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体，人体中大约有1014个外泌体，大约平均每个细胞产生1000-10000个。外泌体中含有核酸（DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等）、蛋白和脂类，在细胞间物质和信息转导中发挥重要作用，研究表明其在干细胞、免疫调控、瘤转移、血管生成以及生物标志物等领域都发挥着不可替代的作用。

外泌体与肺病预后：外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现，外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外，还有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现，NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调，进一步研究发现，let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。外泌体的提取、分离方法：微流控技术。

1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。合肥正规外泌体提取试剂进货价

超离法是较常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。合肥正规外泌体提取试剂进货价

外泌体的提取方法，先用含无外泌体血清的培养基对人脂肪来源间充质干细胞进行饥饿培养，这样可使干细胞处于正常生长状态，不会被克制生长增殖，其所分泌的外泌体所包含的有效物质也更贴近其自然状态下的外泌体，然后将含有外泌体的培养上清液进行低速差速离心(即先一离心处理、再第二离心处理)以去除细胞及其碎片，用100kd超滤管对低速差速离心后的离心液进行超滤浓缩得到外泌体浓度更高的超滤液，将超滤液经过第三离心处理去除杂质后直接用0.22μm过滤器过滤除菌，过滤掉粒径为220nm以上的物质，进一步得到含颗粒粒径小于220nm的浓缩液，因超滤浓缩处理和第三离心处理使得液体量浓缩，这样过滤除菌效率得到较大提高，较后将浓缩液进行超速离心的第四离心处理分离提取到外泌体。合肥正规外泌体提取试剂进货价