广州微滴式数字PCR

研究方向

*****的实时监控

已有数篇文章报道了使用数字PCR技术对患者***过程中的循环**DNA(ctDNA)进行检测，实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比，ctDNA突变及丰度改变通常会提前数月出现，这样就可以提醒医生及时调整***方案，使患者得到更有效的***。

随着数字PCR荧光通道的增加和多指标检测的成熟，数字PCR将会进入更多应用领域，有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。 分辨率——低至0.1倍基因表达差异。广州微滴式数字PCR

基因检测**前沿的两种方法是：高通量测序（NGS）和数字PCR (dPCR)。

      高通量测序技术又称“下一代”测序技术，可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，功能强大，但是实验操作较复杂，数据分析难度较大，检测周期长，成本较高。数字PCR技术是目前**精细**灵敏的基因检测技术，借助微液滴或微腔室，通过单个模板分子的PCR扩增，可实现不依赖于标准曲线和参照样本的***定量。与NGS相比，数字PCR灵敏度高、检测速度快、操作简便、结果易读、成本低廉等优势使其更适合临床检测，成为精细医疗实现平民化、大众化的比较好选择。    

此外，数字PCR还在基因表达差异研究、拷贝数变异(CNV)研究、低丰度DNA模板分子的精确定量、甲基化含量鉴定、二代测序辅助建库、CRISPR-Cas9基因编辑结果验证、转基因成分的检测、移植排异监控、肠道菌群分析以及***基因组检测等众多领域中有着优异的应用。

无锡MicroDrop-100数字PCR品牌MicroDrop™数字PCR平台是由永诺生物自主研发并已投入生产的微滴式数字PCR检测系统。

数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了，但是无奈受限于当时的技术条件，样本稀释及分配都是靠手工来完成的，受到很多因素的干扰和限制；并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐，因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题，推动了dPCR的研究与商业化的发展。

目前根据dPCR样本稀释分配的方式，基本可分为三大类，一种是基于大规模集成微流控芯片；第二种是使用微反应室/孔板；第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式，其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中，每个反应器的核酸模板数少于1或者等于1。经过PCR扩增之后，有一个核酸分子的模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，可以推算出原始溶液的核酸浓度。

研究方向

低丰度及稀有序列的精确定量

目前对于低丰度目标序列的检测，定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下，其重复性就不是很高)， 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴化处理，使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来，从而提高了检测的灵敏度及重复性。

此外，由于样品微滴化处理的同时，也将样品中可能存在的***剂进行了分装，提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度，因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言，毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。 线性范围达到6个数量级，灵敏度高达万分之一。

MicroDrop-100系统产品特点：

一、适应性广，灵活性高

1、理论上可覆盖qPCR（荧光定量PCR)的所有应用

2、样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定

3、开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。

二、灵敏度高，准确性高

1、***定量——无需依赖标准曲线

2、采用微滴式技术高达100,000个的微滴

3、线性范围达到6个数量级，灵敏度高达万分之一

三、可分析复杂混合物

1、准确度不完全依赖于扩增效率

2、双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法

3、支持多重数字PCR

四、操作简单，使用方便

1、全封闭防污染设计，一键式自动化操作。

2、可选全中文分析软件 正压生成油包水的液滴。宁波微滴式数字PCR

单次微滴生成*需2分钟。广州微滴式数字PCR

数字PCR（Digital PCR-dPCR）技术是一种新的核酸检测和定量方法，与传统定量PCR（qPCR）技术不同，数字PCR采用***定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性，dPCR迅速得到***的应用，这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可，而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、**标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。
广州微滴式数字PCR

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