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原代细胞培养实验室常规步骤为： 1）将动物组织从机体中取出并消毒除去存留在组织上的细菌、细菌、等污染源，这些污染源将会所需培养的原代细胞凋亡、停止生长和繁殖直至死亡，因此整个原代细胞培养过程中较全在无菌状态下进行。2）将组织块在选定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分钟， 通常在37C水浴里进行，而蛋白酶的选定取决于部位组织和所需细胞的类型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出单个细胞， 但是对于脑组织和乳腺等软组织，就只能用分解能力较弱的胶原蛋白酶， 以免损伤分散出来的单个细胞。3）将分散而成的单个细胞置于合适的培养基（含有特殊细胞生长因子、添加剂以及血清， 或者无血清培养基）中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖， 整个过程都是在无菌情况下操作。原代细胞在生物医药领域有不可替代性作用，市场前景广阔。正规原代细胞分离试剂盒厂家推荐

原代细胞培养注意事项：1.收到细胞时，要镜下观察是否有污染情况；收到细胞的前几天，要做好各种倍数的镜下拍照记录，以防细胞出现问题后，可以跟公司很好地沟通。2.收到细胞后，不要马上处理。应置于培养箱中静置4h以上再操作。如果不着急，可静置过夜。3.细胞的靠前次传代，一定要密度高一些传代，原代细胞传代密度低，很难长起来。建议1:2-1:3传代。4.原代细胞传代时（内皮细胞，贴壁为例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培养箱内消化30sec，再加入5ml培养基（正常消化贴壁细胞，我们使用胰酶和培养基的量是1:1，但是原代细胞必须用大量培养基中和胰酶）。5.原代细胞不建议冻存，因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话，建议在P2或P3代冻存，冻存液中的血清越多越好，建议比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代细胞复苏时，置于37-38度水浴融化细胞，并加入10ml培养液（正常贴壁细胞复苏时，也可以使用这种比例，复苏成活率会较大提高），离心重悬铺板。广州原代细胞分离试剂盒厂家直销将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。

关于细胞株和细胞系以及原代细胞的区别：1、获取方法不同，原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞；细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物；细胞系是原代细胞培养物经开始传代成功后所繁殖的细胞群体。2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株；细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有变的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。

原代细胞的几大特点：1、生命的起源原代细胞人体起源一个单细胞受精卵(*代干细胞)，经历卵裂(干细胞持续扩增，增加细胞数量)、胚层出现(干细胞开始分化出功能细胞)、组织部位形成(功能细胞的有序排列)及胚后发育这样一个连续过程。2、维持人体动态平衡的种子细胞人体通过干细胞化来实现细胞更新。成年并不意味着细胞增殖和细胞分化的结束，而仍然存在着受调控的组织更新过程。在一些组织中，如骨髓、表皮等，新细胞可不断地产生，以补充因分化而衰老、死亡的细胞。干细胞的增殖保持着机体内细胞的动态平衡。给培养液中加入低浓度的透明质酸复合物。在有搅拌装置的培养器皿内加入培养液。

注意事项：所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒， 如果不是**试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。当前提取效果好的是RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。长沙原代细胞分离试剂盒

也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入**生存环境的变化过程。正规原代细胞分离试剂盒厂家推荐

悬浮型原代细胞：1）必须保持细胞的悬浮状态。可以通过增加培养液的黏度来帮助细胞呈悬浮状态，如给培养液中加入低浓度的透明质酸复合物。在有搅拌装置的培养器皿内加入培养液，以5ml为较低限度，否则搅拌时会产生气泡对细胞造成伤害。使用这种方式需注意勿使搅拌速度过快，否则即可使培养液溢出又容易造成污染。如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。给悬浮培养的细胞换液时要注意不要吸出细胞。2）能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛，体外分裂增殖的速度较快，营养成分消耗大，换液时间隔一般较短。正规原代细胞分离试剂盒厂家推荐