针对双光子荧光显微镜的特点,从理论上分析双光子成像特点,并搭建一套时间、空间分辨率高,能实时、动态、多参数测量的双光子荧光显微镜系统。具体系统应实现∶(1)能对不同染料的双光子荧光进行探测;(2)用特定染料对样品标记以后,能实现双光子荧光的三维成像;(3)通过实验的研究,改进双光子荧光显微成像系统;(4)在保证成像质量的前提下,简化整个系统,使得实验操作方便、安全。单光子激发荧光的过程,就是荧光分子吸收一个光子,从基态跃迁到激发态,跃迁以后,能量较大的激发态分子,通过内转换把部分能量转移给周围的分子,自己回到比较低电子激发态的比较低振动能级。处于比较低电子激发态的比较低振动能级像在生物医学光学成像研究中显示了较大的优势。而在显微成像中,双光子荧光显微镜凭其独有的优点,成为研究细胞结构和功能检测的重要工具。多光子显微镜涉及医学、生物学、化学、物理学、电子学、工程学等学科,生产工艺相对复杂,进入门槛较高。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator
光学成像技术与分子生物学技术的结合为研究上述科学问题提供了条件与可能。因此,在现代分子生物学技术基础上,急需发展新的成像技术。在动物体内,如何实现基因表达及蛋白质之间相五作用的实时在体成像监测是当前迫切需要解决的重大科学技术问题。这是也生物学、信息科学(光学)和基础临床医学等学科共同感兴趣的重大问题。对这-一一科学问题的研究不仅有助于阐明生命活动的基本规律、认识疾病的发展规律,而且对创新药物研究、药物疗效评价以及发展疾病早期诊断技术等产生重大影响。美国清醒动物多光子显微镜系统多光子显微镜适用于动物大脑皮层深层(400微米)细胞的形态、生理学研究。
双光子显微镜工作原理是将超快的红外激光脉冲传输到样品中,在样品中与组织或荧光标记相互作用,这些组织或荧光标记发出用于创建图像的信号。双光子显微镜被多用于生物学研究,因为它能够产生高分辨率的3-D图像,深度达1毫米。然而,这些优点带来了有限的成像速度,因为微光条件需要逐点图像采集和重建的点检测器。为了加快成像速度,科学家之前开发了一种多焦点激光照明方法,该方法使用数字微镜设备(DMD),这是一种通常用于投影仪的低成本光扫描仪。此前人们认为这些DMD不能与超快激光一起工作。然而现在解决了这个问题,这使得DMD在超快激光应用中得以应用,这些应用包括光束整形、脉冲整形、快速扫描和双光子成像。DMD在样品内随机选择的位置上产生5到30点聚焦激光。
当激光光束焦点的位置在镜面上,此时被反射的激光在无限空间中成为准直光束,并在OBJ2的焦平面上形成了一个激光光斑。同理,如果横向扫描光束,则会形成远离倾斜镜镜面的焦点,这又导致返回的光束会聚或发散,进而OBJ2能在轴向不同位置形成焦点,通过这种方式即能实现连续的轴向扫描。对于较小的倾斜角,聚焦没有球差。该组在实验中表征了这种将横向扫描转换为轴向扫描技术的光学性能,并使用它将光片显微镜的成像速度提升了一个数量级,从而可以在三个维度上量化快速的囊泡动力学。该组还演示了使用双光子光栅扫描显微镜以12 kHz进行共振远程聚焦,该技术可对大脑组织和斑马鱼心脏动力学进行快速成像,并具有衍射极限的分辨率。 多光子显微镜的发展历史充满了贡献、开发、进步和数个世纪以来多个来源和地点的改进。
2020年,JianglaiWu等人提出提高2PM横向扫描速率的装置,称为FACED(free-spaceangular-chirp-enhanceddelay)。圆柱透镜将激光束一维聚焦,会聚角为Δθ。光束进入到一对几乎平行的高反射镜中,其间距为S,偏角为α。经过反射镜多次反射后,激光脉冲被分成多个传播方向不同的子脉冲(N=Δθ/α),脉冲间以2S/c的时间延迟(c,光速)回射。FACED模块输出处的子脉冲序列可以看作从虚拟光源阵列发出的光,这些子脉冲在中继到显微镜物镜后形成了一个空间上分离且时间延迟的焦点阵列。然后将该模块并入具有高速数据采集系统的标准双光子荧光显微镜中。光源是具有1MHz重复频率的920nm的激光器,通过FACED模块可产生80个脉冲焦点,其脉冲时间间隔为2ns。这些焦点是虚拟源的图像,虚拟源越远,物镜处的光束尺寸越大,焦点越小。光束沿y轴比x轴能更好地充满物镜,从而导致x轴的横向分辨率为0.82µm,y轴的横向分辨率为0.35µm。多光子显微镜可以进行深层成像,且具有三维成像的能力,可以应用于拍摄不透明的厚样品。在体多光子显微镜Ultima 2P Plus
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由于在重大工程、工业装备和质量保证、基础科研中,仪器仪表都是必不可少的基础技术和装备重点,除传统领域的需求外,新兴的智能制造、离散自动化、生命科学、新能源、海洋工程、轨道交通等领域也会产生巨大需求。中国的新型工业化进程,信息化和工业化融合的进一步加深,带动各个工业领域对于nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo等产品的需求。目前我国生物科技,医药科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,实验室设备、仪器仪表、医疗器械、计算机、软件及辅助设备销售,计算机数据处理,货物及技术进出口业务。 成像平台: 1. Inscopix自由活动超微显微成像系统 2. DiveScope多通道内窥镜系统 3. 双光子显微镜 动物行为学平台: 1. PiezoSleep无创睡眠检测系统 2. 自身给药、条件恐惧、斯金纳、睡眠剥夺、跑步机、各类经典迷宫等 神经电生理: 1.NeuroNexus神经电极 2.多通道电生理信号采集系统 3.膜片钳系统 4.AO功能神经外科临床电生理平台 显微细胞: 1. UnipicK单细胞挑选及显微切割系统 科研/临床级3D打印 1. 德国envisionTEC 3D Bioplotter生物打印机 2. 韩国Invivo医疗级生物打印机等。产品,主要集中在中低档市场,而市场则主要被国外品牌所占据。在某些领域,国产产品甚至是空白,这就需要未来我国仪器仪表向市场进军,扩大产品占比。尽管在我国相关政策的引导和支持下,我国仪器仪表行业得到了飞速发展。但是从销售整体上看,我国的仪器仪表行业还是落后于国际水平的。重点技术缺乏、高精尖产品严重依赖进口、仪器仪表产品同质化严重、生产工艺落后、研发能力弱、精度不高等问题的凸显,为仪器仪表行业的发展带来了严峻的挑战。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator