高效液相色谱的历史
1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）***提出“色谱法”（Chromatography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。茨维特使用色谱法 chromatography 来描述他的彩色试验。
1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。
1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。
1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。
1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。
1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。
1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。
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高效液相色谱相关术语
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：
前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少见。
峰底—基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height，h)—峰的比较高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ
半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。Wh/2=2.355σ
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高效液相色谱分离原理
空间排阻
(Steric Exclusion Chromatography)
空间排阻色谱法以凝胶(gel) 为固定相。它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径比分子筛要大得多，一般为数纳米到数百纳米。溶质在两相之间不是靠其相互作用力的不同来进行分离，而是按分子大小进行分离。分离只与凝胶的孔径分布和溶质的流动力学体积或分子大小有关。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值比较大，在色谱图上***出现。
赛默飞高效液相色谱业务副总裁兼总经理Fraser McLeod表示：“在整个生物制药的流程中，从药物研发到质控的批次放行，数据完整性对于决策是必不可少的。为快速获取可靠结果，灵敏度和通量非常关键。我们开发出的这套系统展示出在复杂分析应用时的**辨分离和重复性。”
• Vanquish Flex UHPLC系统采用独特设计，即便在高通量的情况下，仍可以保证分析物色谱峰拥有尖锐峰形，实现在较短时间内分析更多样品。该系统良好的稳定性和重复性为数据质量提供了可靠保障，确保能够分析大量的样品，以供质控分析比较。其重要特点如下：
• 新型四元梯度泵模块，设计稳健，性能良好，保证高通量的前提下依然可提供方法开发的灵活性。
• 泵比较大耐压 1000 bar，性能***，流速高达 8 mL/min，应用灵活，可实现**辨分离。
• 新型荧光检测器模块灵敏度高，与高灵敏度、宽线性范围的UV、DAD检测器和针对非挥发性化合物的电雾式检测器互为补充。
使用***法规依从的 Chromeleon CDS，可从单一用户界面控制两个**的梯度流路。
反梯度应用 Vanquish Duo 系统
提高定量分析水平，获取更多未知化合物信息
反梯度的 Vanquish Duo 系统可通过电雾式检测技术（CAD）为所有检测分析物提供一致的响应。等度分离可产生一致的 CAD 响应，但某些分离需要采用梯度洗脱导致相应不一致。Vanquish Duo系统通过使用第二个泵对检测器输送反向梯度，可实现：
• 采用 CAD 检测器在梯度洗脱条件下获得一致的响应
• 在无标准品的情况下，可靠地定量已知和未知化合物
• 通过自动反梯度计算功能考查所有系统体积，简化了方法设置
无论化合物何时在梯度中进行洗脱，进入检测器的洗脱液通过反梯度补偿功能，始终保持相同的溶剂组成。即使缺乏特定化合物的单个标准品，也能够可靠地为您提供一致的定量响应信息。
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