杭州MicroDrop-100数字PCR如何选型

       CNV（Copy Number Variations，拷贝数变异）研究需要极高的定量精度以区别不同拷贝数之间的微小差异，测序方法适用于高于30%的变异率检测，而qPCR的比较**辨在1.5倍左右，数字PCR通过直接计数目标基因与参照基因( 拷贝数为1的基因，例如RNaseP) 的数目，计算比值，直接得到目标基因的拷贝数可以达到极高的拷贝数分辨精度。

       除此之外，dPCR在病原微生物检测、microRNA研究、基因表达研究、NGS测序文库的***定量、表观遗传学直接相关的DNA甲基化定量检测、ChIP定量鉴定等领域的应用都令人极为期待，而在转基因成分鉴定、分子标准品精确定量、环境样本检测等具体的应用方向上，已经有大量实验数据和结果证明了dPCR技术的优良性能。

超高灵敏度，适用于稀有序列及稀有突变的检测。杭州MicroDrop-100数字PCR如何选型

       MiniDrop数字PCR仪由Creator微滴生成仪、Detector微滴检测仪、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter数据分析软件组成，该系统的**为微流控微滴生成技术，采用原创性的油液，在40um微管道中利用气压驱动在2分钟内生成50万微滴，单次运行生成400万微滴，微滴体积达皮升级，检测线性范围达到5个数量级，各项指标均超越国内外的主流产品。

       MiniDrop创新性采用高压驱动的方法将样本分割成50万份，打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。 北京JUE对定量数字PCRMicroDrop™数字PCR是拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR仪。

仪器特点：

MicroDrop-100A样本制备仪

1、单张芯片一次可处理8个样本；

2、20微升体系生成100,000微滴；

3、单次微滴生成*需2分钟；

4、一键式自动化操作。仪器参数样本体积20μl容量1~8个样本微滴总数100,000反应时间2分钟/芯片仪器尺寸（宽x深x高）300*400*145mm

MD Detector 微滴检测仪

1、全封闭体系，自动化流程操作；

2、FAM、VIC双通道荧光检测；

3、检测灵敏度高达万分之一；

4、通量达96个样品。仪器参数线性范围6个数量级通量1~96个样本检测通道FAM 、HEX (VIC)仪器尺寸（宽x深x高） 700*500*325mm

       同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。

商业化dPCR平台及其特点

       发展到现在，市面上常见的dPCR主要有两种：微滴式dPCR（droplet dPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chip dPCR，cdPCR）技术。由于芯片式dPCR制造芯片的成本较高，目前微滴式dPCR正越来越受到企业的认可。 准确度不完全依赖于扩增效率。

与常规PCR方法相比，数字PCR有如下优势：

1、能够***定量：常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线，但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系，条件上会存在差异，另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可进行***定量。

2、样本需求量低：适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本。

3、灵敏度高：数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应，这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。

4、高耐受性：由于目的序列被分配到多个**反应体系中，***降低了背景信号和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。 理论上可覆盖qPCR（荧光定量PCR)的所有应用。北京微滴式数字PCR正规代理

单次微滴生成*需2分钟。杭州MicroDrop-100数字PCR如何选型

二代测序辅助建库

       目前靶向测序建库方法包括扩增子方法，在均相溶液中，当扩增引物增加时，由于扩增引物之间的相互作用，从而影响扩增的效率;如果将其分散到大量微液滴中扩增，将可降低引物间相互作用，提高扩增效率。同时还可以实现对于少量模板的有效扩增，得到更多的有效测序数据。

CRISPR-Cas9基因编辑结果验证

       CRISPR-Cas9技术的发明，是基因编辑技术的一大突破，但如何验证实验是否成功，仍需要高灵敏度的检测方法，数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸进行高灵敏度的定性检测，但精确定量评估时仍采取了数字PCR进行确认。 杭州MicroDrop-100数字PCR如何选型

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