微生物限度:细胞培养基不是无菌产品,其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖,导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌,是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民当地药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准,并严于该标准,规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个,霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1g,加入无菌纯化水10mL溶解,混匀即得试样。按中华人民当地药典2005年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法进行,检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。湖南培养基制备器
培养基的灭菌:一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和物品等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。山东全自动培养基制备器一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管。固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染。
在制备培养基时,通常要考虑以下因素:1.缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。2.渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止3.粘度培养基的粘度主要受血清含量的影响,在多数情况下,对细胞生长没有什么影响。在搅拌条件下,用羧甲基纤维素增加培养基的粘度,可减轻细胞损害。这对在低血清浓度或无血清下条件下培养细胞显得尤为重要。培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。
如何避免沉淀物的产生:在使用血清的时候,注意下列的操作:①解冻血清时,请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。②解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。③勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。⑤若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。山东全自动培养基制备器
组合培养基是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。湖南培养基制备器
培养基的质量测试:每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其较终pH。将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。培养基的保存:培养基应存放于冷暗处,较好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。湖南培养基制备器
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