培养基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方称取各种药品,加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状,加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。3、调PH:用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。4、过滤:滤纸或棉花进行过滤。5、分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。(1)三角瓶:若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,较多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。(2)试管分装:液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度。固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。6、包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。7、灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。培养基根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基。海南琼脂培养基制备器
配置培养基注意问题:1、根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。2、注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压。3、将培养基的pH控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。4、要注意各种原料的配比,每种培养基的配比合适的配比,可以按照老师的要求去做。5、如需要加热的时候注意时间的把握。培养基,是指供给微生物、植物或动物生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。西藏自动搅拌培养基制备器培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
湿热灭菌:湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行,高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min,具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000mL,否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却,以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要,例如含有煌绿的培养基。过滤除菌:过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质(如物品),为了达到有效过滤,应事先将滤膜用无菌水润湿。
在制备培养基时,通常要考虑以下因素:(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小,但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4~7.7,转化细胞以pH=7.0~7.4更合适。据报道,上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值,做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂,pH=7.4呈红色,pH=7.0变橙色,pH=6.5变黄色,而pH=7.6呈红色中略带蓝色,pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性,因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样,放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。配制培养基的原则:根据培养目的需要选择适宜的营养物质。
培养基的分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基较终pH之用。培养基中营养物质的浓度过大,会使渗透压过高,使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。大容量 培养基制备器多少钱
为了避免杂菌污染,获得微生物纯培养物,培养基必须及时严格灭菌。海南琼脂培养基制备器
培养基的制备步骤有哪些:第1,用水:培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水,较好不使用离子交换器生产的去离子水。第二,称量。称量时要用独有的角匙,避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸潮,如有条件,尽量在湿度较低的房间称取培养基。第三,复水,复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时一定要进行搅拌,特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出,对于少量的培养基较好使用沸水浴进行加热。海南琼脂培养基制备器
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