在荧光显微术中,不仅蛋白质结构感兴趣,而且对核酸也感兴趣。有时有必要通过检测细胞核来确定细胞的确切位置或数量。最常见的DNA染色剂之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要与DNA双螺旋富含A-T的区域结合。与未结合态相比,DAPI在DNA上的荧光强度增加。染料被UV(紫外线)光激发,比较大激发波长为358nm。发射光谱较宽,峰值在461nm。弱荧光也可以检测到RNA结合。在这种情况下,发射转移到500nm。有趣的是,DAPI能够渗透完整的细胞膜。因此,该染料既可用于固定细胞也可用于活细胞。PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。广东荧光染料合成
罗丹明属于呫吨族。与市场上的许多其他染料相比,罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。它们在聚合物纳米粒子表面的表征、聚合物-生物偶联物的检测、活细胞的成像以及寡核苷酸在胶乳上的吸附分析等方面特别有用。罗丹明荧光染料的衍生物也用作:分子开关,病毒表面修饰,化学传感器,硫醇。不同类型的染料通过它们各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)来区分。由于它们的差异,这些荧光染料在溶液中也表现出不同的光物理特性(例如不同的荧光寿命和发射比较大值)。氨基被刚性化的罗丹明染料无论温度范围如何都表现出高量子产率,而在每个氮处具有两个烷基取代基的那些表现出活化的内部转化,量子产率和荧光寿命随温度的变化而变化。罗丹明101和罗丹明B是一些**常用的罗丹明染料具有以下特点:--羧基倾向于在酸性溶液中质子化--染料转化为两性离子碱性溶液--两性离子染料在极性较小的有机溶剂中变为无色内酯要将罗丹明用作荧光探针,必须对其进行修改。这可以通过(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基环或羧酸基团的修饰来实现。与TRITC一样,罗丹明(NHS-rhodamine)的荧光特性为544nm(比较大吸收波长)和576nm(比较大发射)。青海南京荧光染料罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。
小动物***成像技术(invivoimagingtechnology)是利用高灵敏度的光学检测仪器直接检测动物***体内的细胞活动和基因行为研究的一类技术,是近年来发展**快的生命科学研究方法,是**直接观察细胞和分子在体内行为的新兴技术,已广泛应用于生命科学研究的各个领域[1]。***动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。生物发光是利用荧光素酶报告基因在***内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。而荧光发光成像技术是将荧光物质或荧光物质标记的小分子物质如基因、细胞也可是小分子药物、抗体、纳米材料等导入到***体内,通过小动物***成像系统的激发光源激发荧光集团到达高能量状态,而后产生波长较激发光长的发射光,然后通过高灵敏度制冷CCD镜头探测到***内的发射光。通过***成像技术可以观测***动物体内**的生长和转移、炎症的发生、特定基因的表达和药物作用效果等生物学过程。
本质上,有机染料的特征在于源自在整个生色团上离域的光学跃迁或源自分子间电荷转移跃迁(从激发电子态的分子内电荷转移)的发射。在这里,表现出源自在整个生色团上离域的光学跃迁的发射的染料被称为共振染料(介观染料),而后者被称为CT染料(电荷转移染料)。花青、罗丹明和荧光素是一些最常见的共振染料,其特点是窄的吸收和发射带(略微结构化),往往相互镜像,以及小的、对溶剂极性不敏感的斯托克斯位移。另一方面,CT染料包括香豆素和丹磺酰荧光团等染料,其特点是与共振染料相比,吸收和发射带结构无结构,分离良好,以及更大的斯托克斯位移。同样,与共振染料相比,CT染料具有更小的摩尔吸收系数和荧光量子产率。对于共振和CT荧光染料,在结构-性质关系众所周知的情况下,可以通过精心设计的策略来微调光谱性质。DAPI染色液(DAPI Staining Solution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。
其他细胞结构常用染料生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色细胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。鬼笔环肽(Phalloidin)是细胞骨架的染色神器,罗丹明标记的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可将细胞染成橙红色,DAPI与Phalloidin染色液是研究细胞形态变化时经常用到的两种共染的试剂,染色效果可见A1-E1用TRITC-鬼笔环肽(橙红)染色的细胞骨架免疫荧光图;A2-E2用DAPI(蓝色)染色的细胞核免疫荧光图;A3-E3合并的L929细胞免疫荧光染色图。是S100A16过表达或下调前后PDAC细胞形态的变化。DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料,它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。光声荧光染料Cy5
花青类荧光染料属于共振染料,其特征在于具有离域电荷的氮原子(两个氮原子)之间的聚甲炔染料。广东荧光染料合成
琥珀酰亚胺酯(Succinimidylesters)/NHS酯活性荧光染料用于标记抗体,蛋白质,肽,胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离氨基(-NH2)2、马来酰亚胺(Maleimides)活性荧光染料用于标记抗体,蛋白质和肽上的巯基3、叠氮化物(Azides)活性荧光染料通过点击化学法(Click)标记乙烯基4、炔烃(Alkynes)活性荧光染料通过点击化学方法标记叠氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性荧光染料经碳二亚胺预活化后用于标记胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性荧光染料具有游离氨基的荧光染料,用于与各种亲电子化合物(如活化的酯和环氧化物)偶联。广东荧光染料合成
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