由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性,形成了重叠的肽,从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较,相同材料的标准胰蛋白酶消化物, 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位:OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽,并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。瑞典生物技术公司Genovis率先次提供IdeS工具酶等,用于mAb、ADC药物的开发、生产和质量控制。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白,在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签,分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并释放出聚糖。效率;3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。湖北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱,可在3小时内有效去除C1 抑制剂O-聚糖。

GlycOCATCH®亲和纯化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽亲和纯化的富集树脂。GlycOCATCH亲和纯化以方便的离心柱形式提供。该产品包含:4 个 GlycOCATCH 亲和纯化微离心柱,每个柱能够结合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(总共 200 μg)。Genovis的SialEXO 冻干 200 单位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 冻干 200 单位,用于结合的 O-糖蛋白的可选洗脱方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 复杂样品的特异性净化;3. 用于改进 MS 分析的样品制备。O-糖基化蛋白和肽的特异性富集:O-连接聚糖参与多种生物过程,包括抑制病原体引起的gan染、炎症反应、造血和细胞信号传导。
在这里,Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物,由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰,主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下,反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱,可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而,蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*,在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除,但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益,这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。GalNAcEXO酶是可降低样品异质性,用于分析携带α连接的 GalNAc 残基作为未成熟截短he心 1 的复杂 O-糖蛋白。

与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性,以促进蛋白质的分析,例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化;即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析;与LC-MS兼容。与PNGase F类似,Genvois的与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分:PNGase F;O-糖苷酶。并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亚基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分别分析。江苏用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括:OmniGlyZOR 微离心柱;PNGase F 冻干;RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性,否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化:对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白,OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。 浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用:O-糖蛋白酶。使用...
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