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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基,应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子,如BSA。根据底物的性质,糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成,而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中,以便快速方便地处理样品,在制备过程中不会残留酶。O-糖基化蛋白和肽的特异性富集:包括抑制病原体引起的gan染、炎症反应、造血和细胞信号传导。重庆冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

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Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。江西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,应用GalNAcEXO酶去除剩余的GalNAc残基。

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GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。GalactEXO由两种半乳糖苷酶组成,均带有His标签,组分的分子量为87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的冻干酶。Genovis的GalactEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 单位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-连接的半乳糖。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率; 3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!将混合物加载到GlycOCATCH上,洗涤树脂,并用8M尿素洗脱结合的肽。纯化后,在RP-LC-MS上分离样品。数据显示,糖苷酸肽的选择性纯化,携带he心1-O-聚糖。IgA 特异性 O-糖肽富集:IgA 抗体包含 N-连接的糖基化和重度 O-糖基化的铰链区域。胰蛋白酶消化IgA后,将肽和genovis 的SialEXO的混合物加载到GlycOCATCH树脂上,并用PBS和离心洗涤。用 8 M 尿素洗脱显示预期的 O-糖基化铰链肽富集,具有不同程度的糖基化。

Genovis的GlycOCATCH®是一种亲和树脂,可特异性结合O-糖基化(粘蛋白型)蛋白和肽,从而实现简单的工作流程,以富集和纯化携带O-聚糖的蛋白质和肽。洗涤离心柱,并用8M尿素洗脱结合的蛋白质。对洗脱材料的分析表明,由于洗脱O-糖基化蛋白,并且树脂与非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的结合可以忽略不计。选择性结合 O-糖蛋白:为了测试选择性,将一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白与Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。为了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特异性,将O-glcyosyled肽(糖蛋白)与一系列未修饰的肽混合。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分:PNGase F;O-糖苷酶。

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Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不仅难以研究,其自然异质性也会导致其他分析出现问题。例如,由于样品中存在许多不同的糖型,因此对完整或中等水平的重糖基化蛋白质进行质谱分析可能非常困难。酶法去除N-聚糖的解决方案已经存在多年,Genvois的PNGase F是一种非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑战性,现有的O-糖释放化学方法通常会导致蛋白质发生重大修饰,因此不太适合下游分析。1. 用于方法开发的灵活产品形式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。FucosEXO酶在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为87 kDa和64 kDa,在6至8的pH值范围内显示出高活性。浙江冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

使用OpeRATOR对胞生成素(EPO)进行O-糖位点特异性消化:确定中级水平的 O-糖基化位点。重庆冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

G0F 抗体在 30 分钟内:半乳糖的存在会影响zhiliao性抗体引发的效应功能,为了研究抗体的作用方式,可能需要彻底去除半乳糖残留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠单抗上使用 30 分钟孵育证明。genovis的GalactEXO Immobilized 由强大的 GalactEXO 酶组成,该酶固定在琼脂糖珠上,并以易于使用的微离心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖残基。使用FabRICATOR®将抗体消化成亚基,并使用LC-MS进行分析。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变,但后者在z终制剂中没有留下酶。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。重庆冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

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