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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

C1抑制剂的去糖基化:在O-糖基化生物制药的生产过程中,由于he心GalNAc残基的加工不完全,可能会出现Tn抗原。这表现为具有 203 Da HexNAc 单位差异的重复质量位移。为了确认 Tn 抗原的存在,可以应用以下工作流程,此处在重度(26 个位点)O-糖基化 C1 抑制剂上演示。首先,使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖,使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能测试 :依那西普是另一种具有挑战性的生物制药模型分子,携带 13 个 O-聚糖位点,其中平均 9 至 10 个位点被占用。依那西普是一种 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的铰链区域。云南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

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当在完整状态下进行分析时,EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时,可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖,因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议(在37°C下进行O/N孵育),两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理,并显示数据以供比较。另一方面,N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态,就根本无法接近。因此,这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。河北用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化携带he心 1 O-聚糖的蛋白质,糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 残基的 N 端。

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OglyZOR 来源于口腔链球菌,在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 227 kDa。SialEXO来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达。SialEXO酶含有His标签,组分的分子量分别为42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶;2. 降低样品异质性,揭示潜在的关键蛋白质修饰;3. 完全、稳健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的冻干酶,用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助剂才能发挥作用,因此与2000单位的SialEXO冻干一起提供。

我们测量了FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO可有效释放α1-2、α1-3和α1-4连接的岩藻糖,对α1-6连接的岩藻糖残基没有活Genovis的FucosEXO的底物特异性:岩藻糖以不同的键存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖常见于 O-聚糖中,并作为 N-聚糖的天线岩藻糖基化,而 α1-6 连接的岩藻糖被发现是 N-聚糖he心的修饰。β1-3,4半乳糖的水解:Genovis的GalactEXO 是一种β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-连接末端半乳糖。SialEXO 2-3唾液酸酶,对 α2-3连接的唾液酸靶向水解。

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Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不仅难以研究,其自然异质性也会导致其他分析出现问题。例如,由于样品中存在许多不同的糖型,因此对完整或中等水平的重糖基化蛋白质进行质谱分析可能非常困难。酶法去除N-聚糖的解决方案已经存在多年,Genvois的PNGase F是一种非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑战性,现有的O-糖释放化学方法通常会导致蛋白质发生重大修饰,因此不太适合下游分析。1. 用于方法开发的灵活产品形式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。O-糖基化生物制药(如依那西普)表征:PNGase F、OglyZOR。辽宁冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

依那西普的磷性能测试 :PNGaseF去除N-聚糖。云南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

用于水解离心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的 PNGase F 酶,用于在样品中酶峰减少的糖蛋白上水解 N-糖。 将糖蛋白样品与PNGase F一起在离心柱中固定,然后通过离心步骤轻松收集去糖基化的蛋白质。由于空间位阻,PNGase F对某些糖蛋白的活性可能缓慢或受到抑制 - 在这些情况下可能需要更长的孵育时间或糖蛋白变性。 Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3.z终样品中的酶峰减少。云南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

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