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转染试剂基本参数
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转染试剂企业商机

在一项将质粒DNA转染到HUVEC中的研究中,使用包括Effectene和FuGENE 6在内的非脂质体试剂比脂质体试剂DOTAP(18%)产生了更好的转染效率(34%和33%)。在另一项用质粒DNA转染HUVEC的研究中,与Effectene和FuGENE 6或HD等非脂质体试剂(48小时时均<20%)相比,脂质体试剂显示出更高的转染效率(Lipofectamine LTX在48小时时约为38%,Lipofectamine 2000在48小时时约为23%)。在这些研究中,基于脂质体和非脂质体的试剂转染HUVECs的效率无法得出结论,主要是由于所用试剂的范围存在差异。然而,一致的观察结果表明转染效率仍然存在无论使用何种试剂,低于40%无疑暗示原代细胞是一种难以转染的细胞类型。转染是将外来核酸传递到真核细胞中以修饰宿主细胞的遗传组成的过程。江西转染试剂效率高

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**近的研究已经确定了阳离子脂质体(CLs)的某些特征,这些特征增强了它们在体内转运核酸的能力。这些特征包括阳离子头基团及其邻近的脂肪链在主链上呈1,2关系,醚键用于桥接脂肪链到主链,成对的油基链作为疏水系链。无论如何,这些特征虽然不能决定细胞培养中更好的转染能力,但可以在体内实现更好的核酸递送。因此,必须谨慎对待体外和细胞培养的结果,不能必然地用来推断核酸载体在体内的潜力。当这些囊泡在体内引入时,其他因素(如颗粒直径)变得更加重要。使用脂质体时遇到的毒性通常与制剂中阳离子脂质与核酸之间的电荷比、所使用的制剂类型以及所给脂质体的剂量密切相关。较高的电荷比通常对多种细胞类型的毒性更大,包括*细胞系。另外,不同的试剂对细胞的毒性程度不同,毒性是细胞特异性的。目前市面上有超过30种不同的商用CL制剂品种可供选择。由于毒性,脂质体的体内递送必须尽可能靠近目标部位,以尽量减少副作用。广州转染试剂性价比高并被困在核内小体中,从这些囊泡结构中释放出来,进入核周区域,后进入细胞核。

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流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞,以评估转染效率。另一种评估转染效率的方法是通过监测转染后的特定蛋白表达。将转基因引入细胞可能会改变由转基因或细胞中其他基因编码的蛋白质的表达。同样,转染小RNA也可以调节宿主细胞中特定下游遗传靶点的表达。免疫印迹和免疫荧光染色可用于评估转染后蛋白表达的变化。在这两种方法中,使用特异性抗体结合靶蛋白是至关重要的,后者需要使用与一抗结合的荧光标记二级抗体来检测感兴趣的蛋白质。另一方面,在免疫印迹中,可以使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗与一抗结合,进行特异性蛋白检测。免疫印迹法允许对蛋白质表达进行半定量,而免疫荧光染色法允许通过荧光显微镜或流式细胞术进行定量检测。通过检查特定蛋白表达来评估转染效率更具可重复性和直接性。然而,使用抗体所固有的非特异性蛋白质结合问题和获得假阴性结果的可能性,这可能是由于不及时测定蛋白质表达引起的,仍然是使用这些方法的缺点。

质子泵抑制剂可以通过基于从一个供体蛋白到受体蛋白的能量转移的物理测量来评估,也可以通过化学测量来评估,在化学测量中,表达的蛋白质与另一种蛋白质之间的相互作用活性可以在刺激时通过适当的报告系统来检测。后一种基于荧光素酶的方法被称为生物发光共振能量转移(BRET),它是荧光共振能量转移研究质子泵抑制剂的替代方法。多个质粒的共转染也可以应用于转染,其中包括将编码Cas9蛋白和引导RNA的质粒递送到宿主细胞,使用CRISPR/Cas9基因组工程系统进行基因组编辑。除了使用多个质粒外,双链载体是另一种将不同基因传递到宿主细胞的方法。双链载体是一种能够表达两种不同基因的载体,通过一个内部核糖体进入位点连接,只有一个启动子。常用的物理/机械转染方法包括电穿孔、声孔、基因显微注射和激光照射。

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阳离子脂质体合成中常用的分子是中性脂质二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促进膜融合,并有助于质膜或核内体的不稳定。此外,由于阳离子脂质相互排斥,因此需要DOPE等辅助脂质来稳定阳离子脂质体(CLs)悬浮液,并抵消其他载体如聚乙烯亚胺(PEI)和树状大分子中存在的阴离子糖胺聚糖的抗转染作用。没有中性脂质的脂质体具有较低的转染率,尽管情况并非总是如此。不同的转染率可能是由用于配制脂质体的阳离子:中性脂质的不同比例引起的。如上所述,CLs介导的核酸转移的成功取决于许多因素,这些因素可能解释了脂质体(脂质体介导的转染)的内在变异性,特别是在体内。南京星叶生物正是利用将核酸封装在纳米级脂质体囊泡中的技术,开发出了Gemate系列转染试剂。江西转染试剂帮转染

PLL(聚L -赖氨酸)是生理条件下带正电的多氨基酸,当链长超过20个残基时,它与质粒DNA结合并凝聚成致密颗粒。江西转染试剂效率高

不同种类的纳米颗粒转染细胞系后,产生不同的效率、毒性和组织特异性。这些大量的测试表明,纳米颗粒作为载体的效率与普通的非病毒转染方法相当。Tabatt等人所做的研究比较了使用脂质体、阳离子固体li-pid纳米颗粒和两种商用转染剂对COS-1细胞系(非洲绿猴肾成纤维细胞样细胞)使用四种不同的转染介质所取得的转染效果。固体脂质na-noparticles转染组和溶酶体(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸铵)转染组的荧光素酶基因表达效率没有统计学上的***差异,在每种转染介质中保持相同水平。然而,获得的转染效率低于使用商业转染剂EscortTM 的效率,该转染剂由DOPE(1,2-二-(顺式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)组成。研究人员通过在HepG2细胞(人肝细胞肝*细胞系)上使用固体脂质纳米颗粒,实现了与市买的lipo-fectamine相同的绿色荧光蛋白和荧光素酶蛋白表达水平。江西转染试剂效率高

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