卵子***是人类胚胎发育的起始步骤,该过程主要由细胞内的钙释放调控,当成熟的卵母细胞发育到MII期后,只有精子的PLCζ进入卵母细胞的胞浆,才能***钙震荡,促使卵母细胞完成完整的减数分裂。TFF(Totalfertilizationfailure,完全受精失败)是指MII期卵母细胞无法完成受精的过程,有1-3%的ICSI失败是源于IFF。TFF与精子及卵子的异常均有关,其中卵子***异常是主要因素。卵子因素主要是由蛋白合成不足或异常信号传导导致的胞质不成熟;精子因素主要是PLCζ蛋白的结构、表达和定位异常。受精失败与女方年龄、不育类型和取卵数目等因素无关。精子的解凝功能异常和鱼精蛋白缺失与TFF密切相关。精子染色质组装异常或精子DNA损伤可导致精子的解凝异常,无法***卵子及合子形成。研究表明精子染色质组装异常的精子中精子解凝功能受阻的精子比例高于正常精子。精细胞染色质的鱼精蛋白的合成与组装对于精细胞的基因组浓缩也是非常重要的。若鱼精蛋白的量减少,精子在ICSI后提前解凝,导致受精失败。当精子进入卵子后精子染色质提前浓缩也导致其提前解凝,精子和卵子遗传物质的同步节奏被打破,也造成受精失败。不过这种同步性异常主要还是卵子因素造成的。PRIME TECH PMM 6可用于DNA注射。香港Piezo压电RNA注射
为什么具有“脆性卵膜”的卵子ICSI后容易退化?如下:一、卵子成熟度不足。卵子的成熟包括核成熟(以排出***极体为标志)以及胞质成熟,而胞质成熟往往滞后于核成熟,两者并不完全同步。有对照研究表明,脆性卵膜组的成熟卵细胞比例***低于正常破膜组,ICSI后卵子退化率也高于正常破膜组,这提示了卵子成熟度与卵膜脆性具有一定的相关性,并**终影响了卵子ICSI后是否存活。二、雌***水平。到目前为止,关于雌***水平对脆性卵膜的影响,现有的研究结论并不一致,但归根到底仍然可能是通过影响卵子成熟来改变卵膜的特性。三、ICSI机械操作。一方面ICSI是侵袭性操作,可能破坏卵膜、细胞骨架等细胞器,另一方面是具有脆性卵膜的卵子缺乏“漏斗”的保护作用,细胞骨架和卵膜更容易在ICSI过程中崩解。为避免脆性卵膜卵子ICSI后退化,除了改善注射方式(如进针前利用激光穿透或削薄透明带,操作尽可能轻柔等),还可采用改进的Piezo-ICSI(压电脉冲破膜辅助ICSI),能有效改善注射后卵子退化的情况。此外,在临床促排卵方面,也可考虑调整药物用量,在保证卵泡大小均匀的情况下,尽量推迟扳机时间,提高卵母细胞成熟度,减轻ICSI后卵子退化的比例,以尽可能保证ART***的效果。昆明Piezo Micro Manipulator压电市场认可PRIME TECH PMM 6兼容多种显微操作系统。
注射—将含一个已制动精子的注射管轻柔刺破透明带和卵膜,进入卵母细胞中心。注入精子时,应尽可能少地带入培养液。之后使用负压破坏卵膜,随后轻柔抽吸细胞质。精子置入、穿过卵膜和抽吸细胞质以***卵母细胞的不同方法对受精和胚胎发育率的影响是一个研究热点。压电辅助的ICSI是一种新型方法,目前已在有ICSI结局不良病史和MⅡ期卵母细胞有限的患者中使用。在ICSI操作过程中,该技术对卵母细胞的损伤较小且可改善受精率和胚胎质量。目前使用压电驱动管的新型ICSI注射技术已成功用于多种哺乳动物。由于该注射器采用超声切割力(而不是刺穿力)穿透卵膜,注射过程中卵母细胞几乎没有变形,因此其对卵母细胞的损伤大幅减少。该技术实现的存活率和成功率同样高。注射后,根据标准实验室方案培养卵母细胞。受精ICSI后,受精率为50%-80%。虽然ICSI不可保证一定受精,但完全受精失败的发生率较低,通常发生于获卵数较低的周期。受精失败的原因通常不是未置入精子或卵母细胞排出精子。其可能是由于卵母细胞***失败,这通常与卵母细胞质量较差或精子无活性有关。
PMM可用于移去卵细胞内的染色体,它可以用平口针迅速的穿透透明带,而无须用尖头针。含有染色体的细胞质会混进洗液管,通过透明带的孔抽取出来。PMM和传统方法相比提高了速度和准确率,也就是说增加了效率。细胞核显微注射Piezo可以轻易破坏核的细胞质膜收集核,利用平口针灸可以一次注射1个或更多的核。针在膜的表面形成一个较深的内陷,piezo就很容易破膜将核注射进去。胚胎干细胞显微注射PMM与传统尖头针相比可促进ES细胞注射入胚泡,甚至可以穿透和部分破坏内细胞群,增加ES细胞的作用。平口针的顶端直径为8-12um,大约可装15个ES细胞,用中、低档能量的脉冲,PMM即可穿透细胞群,用低能量的多次脉冲,针可穿透滋养外胚层(TE)。卵母细胞胞浆内单精子显微注射PMM通过将精子尾部与头部割离,精子头部吸入平口针,在中低档能量下即可穿透透明带,进行单精子显微注射。增加了速度和准确率,PMM为转基因鼠高效率的产品。与传统方法相比,Piezo增加了显微注射的速度和准确率,利用MII转基因的方法很有效的生成转基因鼠。压电式显微操作仪PMM可用于ES细胞注射等实验。
下面我们利用压电陶瓷测试压电效应和逆压电效应。
常用的压电陶瓷是由锆钛酸铅(PZT)材料做成的。将PZT材料做成的压电陶瓷片粘在圆形黄铜片上就构成了压电陶瓷元件。它具有明显的压电效应。首先,将压电陶瓷片A的两根引线通过一个按钮开关与信号发生器相联。将压电陶瓷片B的两根引线与扩音器(带喇叭)的输入端相连。将A、B两个压电陶瓷片用黑封泥固定在同一个木板制成的箱子上。当观察者将按钮开关按下,接通信号发生器和压电陶瓷A时,由于逆压电效应,A开始振动,并把振动传给木箱,木箱的振动传给压电陶瓷B,由于压电效应,使B两边产生变化电信号,再传给扩音器使喇叭发声,所以这个实验同时演示了压电效应和逆压电效应。 PMM PIEZO具备良好的可扩展性,可以根据不同的需求进行调整和升级,满足不同医疗机构的需求。美国Piezo Micro Manipulator压电转基因
压电显微操作仪PMM 6可用于猪卵母细胞和胚胎的ICSI等实验。香港Piezo压电RNA注射
什么是压电式PIEZO-ICSI?
压电式-ICSI是一种先进的ICSI技术,可减少对卵子的伤害,并与传统的ICSI相比更能提高受精率。到目前为止,临床研究表明压电式ICSI具有低的卵子降解率(1%)和高的受精率(89%)。相较于传统的ICSI,压电式ICSI使用较细的注射针尖,而注射针尖是钝的而非尖锐的,因此降低伤害卵子的可能性。
电压式PIEZO-ICSI是否安全?研究表明,压电式ICSI并不影响卵母细胞骨架以及对卵母细胞在细胞分裂时染色体的分离没有影响。它也表明,从压电ICSI衍生的囊胚非整倍体率是与常规ICSI类似的。大家可以对比一下电压式-ICSI和常规ICSI对比 香港Piezo压电RNA注射
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