EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中,通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性,适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU染料只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免样品损伤,而且无需抗原抗体反应,能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。EdU细胞增殖检测试剂盒的功能具体介绍。河北口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒优势
4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃预冷20min)。d,封闭液。e,/LPBS缓冲液。2、染色方法a,取出培养有细胞的盖玻片,用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛试问固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min,PBS洗两次,5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室温封闭30min-1h。e.去封闭液,直接加入一抗,37℃孵育1h或4℃过夜。抗体以mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。,10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗,37℃,孵育1h。,10min/次,用滤纸吸干。(PBS配制)封片。j.免疫荧光显微镜下观察,或于4℃避光保存。免疫荧光双标记方法免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子,当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些,应注意所用的一抗是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如:A抗体为多克隆抗体,来自家兔;B抗体为单克隆抗体,来自小鼠)。其次,两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠,且尽量远离,通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下,染色时两种一抗可以同时孵育,然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱,而另一种颜色比较强时,应考虑先孵育颜色较弱的二抗。福建如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒评价EdU细胞增殖检测试剂盒的重要组成部分。
避免反复冻融。如短时间内需多次重复使用,请于4℃避光保存,有效期半年。使用前须知该试剂是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。实验准备1、盖玻片2、1×PBS()(用DEPC水配置)3、含TritonX-100的PBS(用DEPC水配置)4、甘氨酸溶液(2mg/ml)(用DEPC水配置)5、培养板或培养皿实验参考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培养基100μl200μl300μl500μl1ml染色反应液100μl200μl300μl500μl1ml实验步骤(以96孔板,HK2贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞,以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中,培养至正常状态。EU标记1、将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EU溶液,制成2×EU标记培养基;2、提前将2×EU标记培养基预热,然后等体积加入到细胞原有培养基中,获得1×EU溶液,其中EU的终浓度为500μM;注:1)我们不建议替换全部培养基,因为这样可能会影响细胞增殖的速度;2)配置好的培养基建议现用现配,用量以没过细胞为宜;3、每孔加入300μl含EU培养基孵育细胞2小时,弃培养基。
通过以上原理图的对比,大家不难发现,EdU法检测细胞增殖,无须抗体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的创新方法。但是,现在依然有很多研究者们依然没有得到细胞增殖检测*行之有效,节约反应时间的方法。EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。Abbkine的EdU检测试剂盒有两个型号,分别匹配的是两种不同的荧光通道,细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(绿色荧光),KTA2030,488通道;细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(橘红色荧光),KTA2031,549通道。EdU细胞增殖检测试剂盒可以去哪里购买?
可通过CellProliferationELISA,BrdU(比色法.)或CellProliferationELISA,BrdU(发光法)进行细胞群落中DNA合成测定(BrdUbased)。优点是:实验结果同增殖细胞数目紧密相关,可一步完成细胞的温和固定和变性,操作方便稳定,不破坏细胞形态。5-Bromo-2´-dULabeling/DetectionKitI(荧光法)或KitII(AP)可使用试剂盒提供的BrdU单抗,以及酶或荧光偶联二抗,检测单细胞水平的DNA合成(BrdUbased)。前者通过免疫荧光检测,后者通过荧光显微镜检测。优点是:使用核酸酶变性DNA,在不伤害细胞完整性的情况下使抗体结合BrdU。EdU细胞增殖检测试剂盒应用再哪些地方?江苏口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒说明书
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上海东寰活细胞能将四咪唑盐(如MTT、XTT、WST-1)还原成有色的甲瓒或甲瓒盐(Formazan),可通过分光光度计或酶标仪进行检测。CellCountingKit–8(96992)和CellProliferationReagentWST-1中的WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中,生成的甲臜量与活细胞数量成正比。基于CCK-8(WST-8)的试剂盒能高度准确地检测细胞增殖,比MTT法及XTT法的灵敏度高5倍,能检测更低的细胞数目。该试剂盒可适用于96孔板培养的贴壁或悬浮细胞。河北口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒优势
具有保密性的材料除外)。2、目的蛋白相应一抗:请您提供质量保证的一抗(或委托我公司准备)。抗体的使用...
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