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IdeS蛋白酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • A0-FR8-020等
  • 货号
  • A0-FR8-020
  • 中文描述
  • FabRICATOR
  • 规格
  • 2000U/5000U等
  • 级别
  • 研发级
  • 应用领域
  • 抗体酶切、抗体去糖基化、抗体偶联、蛋白质组学、聚糖图谱、亲和
IdeS蛋白酶企业商机

大多数zhiliao性抗体都携带人IgG1骨架,双特异性和多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性,例如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,这需要优化以极大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的FabDELLO与IdeS酶具有不同的特异性,它在铰链上方的单个位点消化人IgG1,并产生完整的Fab和Fc片段。为了证明FabDELLO的特异性活性,通过非还原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的选择。所有底物均实现了完全消化,包括具有其他困难的LALA和LFLE突变的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精确和有效性能验证了其在生物制药开发中的用途。这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体。四川IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白组学

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Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)试剂盒可消化兔 IgG,但要在亲和步骤中捕获 Fc 片段,您需要另一种填料,而不是试剂盒中通常包含的 CaptureSelect™ Fc。如果您对处理兔IgG感兴趣,请联系Genovis团队,我们将在FabRICATOR Fab2试剂盒中提供与兔Fc相容的树脂色谱柱。使用FabRICATOR的抗体消化的简单性、速度和可重复性也意味着这种酶可以被用于质量控制应用。 QC方法需要执行简单,易于训练,高度可重复,数据易于分析,这正是您使用FabRICATOR所得到的。 因为它适用于一系列不同的IgG,这也意味着使用FabRICATOR进行QC工作的客户将能够在未来的产品中使用它。 这显示了这种酶在抗体消化中是多么的有效。山东GlySERIASIdeS蛋白酶可用于如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化等。

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与IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小时内完成,并且由于酶的特异性,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。该酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。活性是在37°C下,但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgASAPSub1是从口腔链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为148kDa。IgASAPSub1冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。

LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法,用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 (CQA),例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰(PTM)的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱,可快速进行单克隆抗体的柱上酶切,并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR(IdeS)酶,可在铰链下方快速且特异性地消化IgG,产生F(ab')2和Fc片段,而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案,FabRICATOR被共价固定在树脂上,并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱,只需稍作修改,即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后,FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相(RP)色谱柱的柱头上。可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如 Gly4Ser 和 GlyxSery (GS) 以及聚甘氨酸 (G) 接头。

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Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)与IdeS酶一样是特异性蛋白酶。在二维核磁共振波谱 (2D-NMR) 之后,可以通过 HOS 分析在精确的原子水平上评估 mAb 的关键质量属性。从Genovis的FabALACTICA Immobilized获得均相Fab和Fc片段的工作流程,是评估嵌合单克隆抗体英夫利昔单抗中HOS的理想选择,在海报“FabALACTICA产生纯和均相的mAb亚基,促进2D-NMR波谱分析”中进行了描述。来自生成的 Fab 和 Fc 片段的高质量信号和光谱分辨率导致能够观察 Fab 和 Fc 之间的结构变化、氧化和非氧化样品之间的差异,并通过观察原子分辨率来比较原研剂和生物仿制药的 HOS。Genovis酶的适应于克隆筛选,工艺开发和验证以及稳定性研究,也适用于受控环境中的批次放行方法。天津GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

GlySERIAS酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。四川IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白组学

对于涉及完整Fab或Fc抗体片段的应用,需要在抗体铰链处进行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等传统酶可用于生成 Fab 片段,但非特异性酶活性需要仔细优化,以极大限度地降低多个消化位点的风险。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一个消化位点,可从人 IgG1 生成均质的 Fab 和 Fc 抗体片段。生成的片段可用于结晶和高阶结构 (HOS) 的 NMR 研究、结合研究等。在这里,我们提出了获得完整Fab和Fc抗体片段的不同策略。所得片段显示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或从依那西普上的融合 TNFR 结构域中分离 Fc。由于 GingisKHAN 的特异性消化依赖于 IgG 的天然折叠,因此在变性条件下特异性受到负面影响。为了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上样缓冲液之前,停止在分析样品中加入碘乙酰胺的反应。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。四川IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白组学

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