三、脂质体组成对转染效率的影响不同脂质组成的影响:研究发现脂质体的组成对不同类型细胞的转染效率有影响。例如,四种不同的DOTAP与DOPE重量比的脂质体配方对不同细胞系的转染效率不同。Huh7和AGS细胞的比较好脂质体组成是T1P0和T3P1;COS7细胞是T3P1和T1P1;A549细胞是T1P1和T1P36。脂质体结构的影响:脂质体复合物的形状会随着DOPE比例的增加从层状结构变为倒六角形结构,但在所有使用的细胞系中,特定结构在转染效率上没有明确的优势6。四、其他因素的影响血清的影响:对于某些细胞,血清的存在会影响转染效率。如Siha细胞在无血清培养基中培养时转染效率更高,而在Caco-2细胞的转染中,血清在本实验室条件下并不影响转染效率19。细胞传代次数:Caco-2细胞在2-5次细胞传代时转染效率比较高9。综上所述,脂质体转染对不同类型细胞的影响存在多方面的差异,包括转染效率、影响因素以及脂质体组成等。在进行脂质体转染实验时,需要根据不同的细胞类型优化转染条件,以获得比较好的转染效果。PHP是由天然来源的羟基脯氨酸(如胶原蛋白、明胶和其他蛋白质)制成的,是一个用作基因载体的聚酯。江西polyplus转染试剂
开发新型动物摇篮可以实现小动物的多重成像,提高成像效率。开发新型动物摇篮的小动物多重成像方式:采集和评估高通量多鼠成像:KimHunnyun、ImGeunHo和YoonYeup开发了一种可以修改和调整以适应多种成像模型的新型动物摇篮4。与以往只能成像一只小鼠的摇篮不同,这个新的摇篮可以同时成像四只小鼠,还可以获取具有PET/MRI和PET/CT图像的高吞吐量多鼠成像的融合图像。通过将PET动态成像技术应用于高吞吐量MMI方法,还可以同时获取动态脑图像。七、红外成像技术在畜牧业中的应用红外成像技术在畜牧业中具有广泛的应用前景。Infraredimaginganewnon-invasivemachinelearningtechnologyforanimalhusbandry:ManaseeChoudhury、TulikaSaikia和SantanuBanik介绍了红外成像技术在畜牧业中的应用5。红外热成像技术因其非侵入性、易于自动化和高灵敏度等特点,在动物疾病检测和缓解方面的应用越来越***。该技术可以确认***动物身体部位温度的升高,还可用于检测排卵、雄性生育力、应激水平、肉质、种群规模等。由于其易于操作,可以作为疾病诊断的**筛查工具,但仍需要进一步研究以获得更准确的诊断结果。湖北polyplus转染试剂流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞,以评估转染效率。
核细胞、关节软骨细胞、间充质干细胞(MSCs):选择两种合成转染试剂(阳离子脂质商业试剂LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亚胺(PEI))以及两种天然衍生转染试剂(多糖壳聚糖(98%脱乙酰化)和透明质酸(20%酰胺化)),用于将siRNA递送到包括髓核细胞、关节软骨细胞和间充质干细胞在内的原代间充质细胞中。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(***DH)作为内源性模型基因,在转染后第3天和第6天评估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外,还评估了细胞毒性、DNA含量变化和细胞分化潜能等非特异性影响。在四种转染试剂中,基于商业脂质体的试剂在20nMsiRNA时是**有效的siRNA递送试剂,其次是壳聚糖。使用阳离子脂质体、壳聚糖和PEI转染显示出不同程度的活力和DNA含量下降,这取决于所评估的siRNA剂量和细胞类型,但与***DH敲低无关。一些对DNA含量的影响并不伴随着活力的相应变化。然而,细胞周期抑制或进展的标记基因(如p21和PCNA)的表达变化不能解释DNA含量的变化。有趣的是,发现了***DH活性的非特异性上调,这***于软骨细胞15。肝*细胞HepG2和:比较两种人类细胞模型中两种转染剂,即基于脂质体的Lipofectamine™RNAiMAX和基于聚合物的GenMute™。
选择合适的转染试剂阳离子脂质体:如LipofectamineTM2000等阳离子脂质体是常用的转染试剂。通过优化转染条件,如转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间等,可以提高转染效率。例如,在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞的试验中,当转染前细胞融合达到90%以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高,并且在转染后48h转染效果比较好,对细胞的毒性作用较小4。二、利用天然阳离子肽混合物——鱼精蛋白作为稳定剂和增强剂:鱼精蛋白不仅可以作为肝素的中和药物和缓释胰岛素配方中的化合物,还可以用于核酸的细胞递送。自***作为转染增强剂使用以来,鱼精蛋白已被***用作RNA递送的稳定剂。它能保护RNA免受生物系统内的降解,并增强其对细胞的穿透能力。例如,鱼精蛋白稳定的RNA递送系统可以根据***目标进行调整,如与靶向抗体融合实现精确递送、消化成细胞穿透肽提高转染效率或与功能性聚合物非共价混合等。纳米颗粒,由于其在DNA转运到细胞中的保护能力,在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。
在人类多能干细胞衍生的心肌细胞(HPSC-CMs)中的应用低转染效率是实现HPSC-CMs在疾病建模和心脏修复研究中广泛应用的障碍。通过优化四个基本参数,即血清补充剂、复制和转染之间的时间、试剂与DNA比以及细胞密度,使用Promega的Viafect™转染试剂能够将HPSC-CMs转染至约95%的效率28。尽管活力有所降低,但转染后的HPSC-CMs仍保持了高纯度和结构完整性,确保了至少14天的转染基因持续表达,为心脏相关疾病的研究开辟了新机遇。在C2C12细胞中的应用C2C12细胞在肌肉领域***使用,但它们和原代成肌细胞一样难以转染,影响了下游实验。虽然自2015年以来超过95%的使用C2C12细胞的报告使用了一种金标准转染剂(如Lipofectamine®),但有研究表明其效率低于30%。通过比较五种商业试剂(Lipofectamine®3000、Viafect™、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®)在C2C12细胞中的转染效率,发现通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度,所有试剂都能达到超过60%的转染效率,且对细胞生长和活力影响有限。这些试剂还能在C2C12细胞中转染后高效生成GFP阳性的肌管,但在转染siRNA和对原代肌肉细胞的转染中表现出较低效率和较高毒性3。化学转染的效率可能取决于几个因素,如使用的试剂类型、靶细胞的来源和性质,以及选择的DNA与试剂比例。重庆转染试剂好用
PEI的分子量对细胞毒性和基因转移活性有影响。江西polyplus转染试剂
诱导交替剪接和恢复功能蛋白:某些转染试剂在将RNA导入细胞后,可诱导特定的生物学效应。例如,2'-OMeUtaPS介导的转染,在HeLapLuc705细胞中,转染的反义PMO序列诱导了编码萤光素酶的前mRNA的外显子23的交替剪接,恢复功能性萤光素酶的生产,而不会损害细胞毒性5。在肌营养不良症mdx小鼠模型的肌管肌肉细胞中,靶向聚A尾PMO序列针对编码肌营养不良蛋白的前mRNA的剪接位点,触发交替剪接事件,导致突变外显子(外显子23)从pre-mRNA中切除并产生功能性肌营养不良蛋白2。提高转染效率和减少细胞死亡:为了优化并促进将病毒RNA导入哺乳动物细胞,研究人员比较了不同的市售RNA转染试剂将黄热病病毒(YFV)和丙型肝炎病毒(HCV)RNA复制子递送至Huh7细胞的能力,并与电穿孔进行比较。结果发现,如果适当优化,某些试剂将优于电穿孔,细胞死亡少得多,RNA需求少,转染效率提高3。江西polyplus转染试剂